SIRT1調(diào)控Nrf2信號通路對宮頸癌細胞增殖、凋亡及遷移侵襲的影響

盧霞，許旭

宮頸癌在中國已成為中青年女性的第二大高發(fā)惡性腫瘤，每年新發(fā)病例占全球病例的28%以上[1]。沉默信息調(diào)節(jié)因子1(silent information regulator 1，SIRT 1)是一種組蛋白去乙酰化酶，是調(diào)節(jié)細胞應(yīng)激、誘導(dǎo)細胞凋亡的重要分子[2]。臨床研究表明SIRT1隨宮頸病變的加重表達升高，對宮頸癌的發(fā)生和發(fā)展發(fā)揮促進作用，且SIRT1表達與宮頸癌的不良臨床預(yù)后相關(guān)；體外實驗發(fā)現(xiàn)SIRT1在人乳頭狀瘤病毒(human papilomavirus,HPV)感染的宮頸癌細胞中過表達[3-4]。然而SIRT1促進宮頸癌發(fā)生發(fā)展的具體作用機制目前尚不明確。核因子E2相關(guān)因子2(nuclear factor-E2-related factor 2，Nrf2)信號通路可通過調(diào)節(jié)機體氧化應(yīng)激維持細胞的正常生理活動，Nrf2異常激活會引起Nrf2蓄積，導(dǎo)致Nrf2下游產(chǎn)物增多，增加腫瘤細胞對化療藥物的耐受性[5]。有研究發(fā)現(xiàn)，Nrf2蛋白在宮頸癌組織和細胞中高表達，上調(diào)Nrf2促進宮頸癌細胞的增殖、遷移和侵襲，下調(diào)Nrf2的表達后可抑制腫瘤細胞的增殖、侵襲和遷移，促進細胞凋亡[6]。據(jù)報道，SIRT1在細胞氧化還原平衡和抗氧化應(yīng)激中起重要作用，Nrf2的表達可受到SIRT1的正調(diào)控[7]。因此本研究探討SIRT1調(diào)控Nrf2信號通路對宮頸癌細胞增殖、凋亡及遷移侵襲的影響，從分子角度闡述SIRT1促進宮頸癌發(fā)生發(fā)展的作用機制。

1 材料與方法

1.1 實驗試劑

宮頸癌細胞株Hela細胞購自美國ATCC、胎牛血清購自美國Gibco公司、RPMI-1640培養(yǎng)基購自北京天潤善達生物科技有限責(zé)任公司、TRIzol Reagent購自美國Invitrogen公司、SIRT1、Nrf2、NQO1、GAPDH普通PCR上下游引物購自廣州華大生物科技有限公司、SYBR Green PCR Master Mix購自TaKaRa、RevertAid First Strand cDNA Synthesis Kit購自Thermo Scientific、RIPA裂解液購自上海申能博彩生物科技有限公司、BCA蛋白濃度測定試劑盒購自Thermo公司、SIRT1單克隆抗體、Nrf2單克隆抗體、NQO1單克隆抗體、HO-1單克隆抗體均購自美國Abcam公司、HRP標記山羊抗兔IgG購自美國Santa Cruze公司。……