結(jié)直腸癌組織中EGFR、Ki-67蛋白的表達(dá)及其與臨床病理特征的關(guān)系研究

王 玉

焦作市第二人民醫(yī)院(河南 焦作 454150)

結(jié)直腸癌是臨床常見的胃腸道腫瘤之一,其發(fā)生與遺傳因素、飲食習(xí)慣等密切相關(guān),隨著人們生活水平的不斷提高,其發(fā)病率呈明顯上升趨勢(shì)[1]。腫瘤發(fā)病是一個(gè)多因素、多基因、多步驟的過程;并涉及多種蛋白質(zhì)表達(dá)差異,與腫瘤的發(fā)生、進(jìn)展、預(yù)后及生物學(xué)行為等密切相關(guān)[2-3]。表皮生長(zhǎng)因子受體(EGFR)是一種跨膜糖蛋白受體,具有酪氨酸激酶活性,活化后可激活一系列細(xì)胞內(nèi)信號(hào)途徑,促進(jìn)血管生成、細(xì)胞增殖,在腫瘤的發(fā)生、進(jìn)展中起到重要作用[4]。Ki-67是一種與腫瘤發(fā)生、進(jìn)展、轉(zhuǎn)移和細(xì)胞增殖活性密切相關(guān)的增殖細(xì)胞標(biāo)志之一。為此,本研究旨在分析結(jié)直腸癌組織中EGFR、Ki-67蛋白的表達(dá)及其與臨床病理特征的關(guān)系。信息如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇2017年5月至2019年6月于我院行結(jié)直腸癌根治術(shù)治療收集的病理標(biāo)本120例為研究組,術(shù)前未接受任何化療、放療治療,同時(shí)收集患者正常結(jié)直腸標(biāo)本作為對(duì)照組。120例患者女47例,男73例;年齡27～84歲,平均年齡(63.45±6.32)歲;TNM分期:Ⅰ期12例,Ⅱ期41例,Ⅲ期53例,Ⅳ期14例;分化程度:低分化31例,中分化64例,高分化25例;無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移54例,有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移66例;浸潤(rùn)程度:肌層以外108例,肌層及以內(nèi)12例;腫瘤部位:右側(cè)47例,左側(cè)73例。

1.2方法 將手術(shù)標(biāo)本放置在10%中性福爾馬林固定,經(jīng)石蠟包埋后連續(xù)切片,每塊石蠟組織切成2張,厚度約5μm,分別用于Ki-67、EGFR蛋白染色,使用免疫組化二步法染色;采用購(gòu)買自上海長(zhǎng)島生物科技有限公司試劑盒,操作步驟嚴(yán)格按照試劑盒說明實(shí)施;以已知陽性切片作為陽性對(duì)照,將磷酸鹽緩沖液代替一抗作為陰性對(duì)照。

1.3結(jié)果評(píng)定 Ki-67以細(xì)胞核呈棕黃色分布為陽性,EGFR以細(xì)胞膜呈棕黃色分布為陽性。在400倍高倍顯微鏡下,每張切片隨機(jī)選擇5個(gè)視野,計(jì)數(shù)陽性細(xì)胞的百分?jǐn)?shù),結(jié)果取平均值。陰性(-):陽性細(xì)胞所占比例≤10%;弱陽性(+):陽性細(xì)胞所占比例11%～25%;中度陽性(++):陽性細(xì)胞所占比例26～50%;強(qiáng)陽性(+++);陽性細(xì)胞所占比例>50%。

1.4觀察指標(biāo) ①對(duì)比兩組Ki-67、EGFR蛋白陽性表達(dá)率差異;②分析Ki-67、EGFR陽性表達(dá)率與結(jié)直腸癌臨床病理特征關(guān)系:年齡、性別、TNM分期、分化程度、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、浸潤(rùn)程度、腫瘤部位等。

2 結(jié)果

2.1兩組Ki-67、EGFR陽性表達(dá)率比較 研究組Ki-67、EGFR陽性表達(dá)率高于對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

圖1 EGFR在結(jié)直腸癌組織中表達(dá)(×400)

圖2 Ki-67在結(jié)直腸癌組織中表達(dá)(×400)

2.2Ki-67、EGFR陽性表達(dá)率與結(jié)直腸癌臨床病理特征關(guān)系 結(jié)直腸癌中隨著TNM分期增高、分化程度降低而Ki-67陽性表達(dá)率呈增高趨勢(shì),且有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移Ki-67陽性表達(dá)率高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);結(jié)直腸癌中隨著腫瘤分化程度降低EGFR陽性表達(dá)率逐漸增高,且淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移EGFR陽性表達(dá)率高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移,左側(cè)腫瘤EGFR陽性表達(dá)率右側(cè),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表2 Ki-67、EGFR陽性表達(dá)率與結(jié)直腸癌臨床病理特征關(guān)系n(%)

3 討論

結(jié)直腸癌是一個(gè)多基因、多因素共同作用的結(jié)果,隨著對(duì)遺傳學(xué)和腫瘤分子生物學(xué)的認(rèn)知以及對(duì)細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑研究不斷深入,腫瘤細(xì)胞內(nèi)部抑癌基因和癌基因的相互作用逐漸受到臨床重視,基因表達(dá)調(diào)控異常或基因突變會(huì)使癌細(xì)胞過度擴(kuò)增風(fēng)險(xiǎn)增加,造成癌細(xì)胞促凋亡或正常分化過程顯著失常[5-7]。

EGFR是酪氨酸蛋白激酶家族成員,也是Ⅰ型受體酪氨酸激酶,當(dāng)其結(jié)合配體后,能使酪氨酸蛋白激酶途徑活化,參與激活一系列復(fù)雜的細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑,在其介導(dǎo)的癌細(xì)胞的惡性生物學(xué)行為和腫瘤細(xì)胞形成中起到重要作用[8]。在多種實(shí)體腫瘤中EGFR異常表達(dá)或過度表達(dá)涉及腫瘤細(xì)胞的增殖、分化、侵襲、轉(zhuǎn)移、細(xì)胞凋亡抑制、新生血管形成、內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定等方面。Ki-67屬于核抗原,與細(xì)胞增殖特異相關(guān),主要用于判斷細(xì)胞增殖活性,其在靜止細(xì)胞中不表達(dá),在細(xì)胞周期S期、G1晚期、M期等活動(dòng)期的增殖細(xì)胞中表達(dá),其表達(dá)水能相對(duì)客觀的反映腫瘤細(xì)胞增殖狀態(tài),是一種判斷腫瘤惡性程度和評(píng)估預(yù)后的重要指標(biāo)[9-10]。本研究中,研究組Ki-67、EGFR陽性表達(dá)率高于對(duì)照組,提示Ki-67、EGFR參與結(jié)直腸癌的發(fā)生。結(jié)直腸癌中隨著TNM分期增高、分化程度降低而Ki-67陽性表達(dá)率呈增高趨勢(shì),且有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移Ki-67、EGFR陽性表達(dá)率高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移;結(jié)直腸癌中隨著腫瘤分化程度降低EGFR陽性表達(dá)率呈逐漸增高,左側(cè)腫瘤EGFR陽性表達(dá)率右側(cè),提示Ki-67、EGFR蛋白表達(dá)與患者病情嚴(yán)重程度和預(yù)后密切相關(guān)。

綜上所述,Ki-67、EGFR表達(dá)與結(jié)直腸癌發(fā)生、進(jìn)展密切相關(guān),參與腫瘤分化、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期等多方面,可將Ki-67、EGFR作為結(jié)直腸癌潛在的診斷、預(yù)后評(píng)估指標(biāo)。