采用微柱凝膠法進(jìn)行溶血三項(xiàng)試驗(yàn)診斷新生兒溶血病的效果研究

梁超堅(jiān)，曾德理，龐麗麗，覃碧靜

（廣西壯族自治區(qū)婦幼保健院，廣西 南寧 530000）

新生兒溶血病（Hemolytic disease of the newborn，HDN）是一種由母嬰血型不合而誘發(fā)的新生兒免疫溶血性疾病。臨床上最常見的HDN為新生兒ABO溶血病（指因母子ABO血型不合而導(dǎo)致的HDN），其次為新生兒Rh溶血病。肝脾腫大、黃疸是HDN患兒的主要臨床表現(xiàn)，部分病情嚴(yán)重者可發(fā)生膽紅素腦病[1]。對(duì)此病患兒的病情進(jìn)行早診斷、早治療是控制其病情、改善其預(yù)后的關(guān)鍵。目前，臨床上主要是通過進(jìn)行溶血三項(xiàng)試驗(yàn)（包括直接抗人球蛋白試驗(yàn)、抗體釋放試驗(yàn)及游離抗體試驗(yàn)）來診斷HDN。微柱凝膠法是一種新型的將抗原抗體反應(yīng)與凝膠層析技術(shù)相結(jié)合的檢測技術(shù)。本文主要是探討采用微柱凝膠法進(jìn)行溶血三項(xiàng)試驗(yàn)診斷HDN的效果。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2018年5月至2019年10月期間我院收治的500例疑似患有HDN的新生兒作為研究對(duì)象。在這些新生兒中，有男285例，女215例；其日齡為1～6 d，平均日齡為（1.93±1.01）d。

1.2 方法

采用微柱凝膠法對(duì)這500例新生兒及其母親進(jìn)行ABO血型及Rh（D）血型鑒定，方法是：抽取其靜脈血2 mL，置于抗凝試管中，采用微柱凝膠卡式法進(jìn)行血型鑒定。依據(jù)《全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》中的規(guī)定進(jìn)行操作。微柱凝膠血型卡由長春博迅生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)，檢驗(yàn)過程中所用的抗-A、抗-B標(biāo)準(zhǔn)血清、ABO標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞和Rh（D）血型鑒定試劑均由上海血液生物醫(yī)藥有限公司生產(chǎn)。采用微柱凝膠法對(duì)這500例新生兒進(jìn)行溶血三項(xiàng)試驗(yàn)，方法是：1）直接抗人球蛋白試驗(yàn)。采集新生兒的靜脈血2 mL，對(duì)血液標(biāo)本進(jìn)行離心處理，分離出紅細(xì)胞。用生理鹽水對(duì)分離出的紅細(xì)胞進(jìn)行多次洗滌，配制成0.8%的紅細(xì)胞懸液。將50 μl的紅細(xì)胞懸液加入到微柱凝膠孔中，進(jìn)行10 min的離心處理（轉(zhuǎn)速為1030 r/min），然后對(duì)結(jié)果進(jìn)行觀察、判讀。若紅細(xì)胞抗原與相應(yīng)抗體在微柱中形成的特異性抗原抗體復(fù)合物浮在凝膠表面或膠中，可認(rèn)定檢測結(jié)果呈陽性。2）游離抗體試驗(yàn)。配制0.8%的標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞懸液。在微柱凝膠卡的A孔、B孔和O孔中分別加入50 μl的A、B、O紅細(xì)胞和50 μl的血清。將上述標(biāo)本置于37℃的凝膠卡孵育器中孵育15 min后進(jìn)行10 min的離心處理（轉(zhuǎn)速為1030r/min），然后對(duì)結(jié)果進(jìn)行觀察、判讀。判定試驗(yàn)結(jié)果呈陽性的標(biāo)準(zhǔn)同上。3）抗體釋放試驗(yàn)。將500 μl經(jīng)過4次洗滌的紅細(xì)胞置于試管中，并在試管中加入等量的生理鹽水。將上述標(biāo)本置于56℃的水浴箱中孵育10 min后進(jìn)行1 min的離心處理（轉(zhuǎn)速為3000 r/min），取上清液作為放散液。在微柱凝膠卡的A孔、B孔和O孔中分別加入50 μl的A、B、O紅細(xì)胞，然后各加入100 μl的放散液，在37℃的凝膠卡孵育器中孵育15 min，之后進(jìn)行10 min的離心處理（轉(zhuǎn)速為1030 r/min）。對(duì)結(jié)果進(jìn)行觀察、判讀。判定試驗(yàn)結(jié)果呈陽性的標(biāo)準(zhǔn)同上。

1.3 觀察指標(biāo)

觀察對(duì)這500例新生兒及其母親進(jìn)行ABO血型及Rh（D）血型鑒定的結(jié)果。觀察采用微柱凝膠法對(duì)這500例新生兒進(jìn)行溶血三項(xiàng)試驗(yàn)的結(jié)果。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

用SPSS 20.0軟件處理本研究中的數(shù)據(jù)，計(jì)數(shù)資料用%表示，用χ2檢驗(yàn)，計(jì)量資料用±s表示，用t檢驗(yàn)，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 對(duì)這500例新生兒及其母親進(jìn)行ABO血型及Rh（D）血型鑒定的結(jié)果

對(duì)這500例新生兒及其母親進(jìn)行ABO血型鑒定的結(jié)果顯示，這些新生兒中ABO血型為A型的新生兒有225例（占45%），為B型的新生兒有275例（占55%），其母親的ABO血型均為O型。對(duì)這500例新生兒進(jìn)行Rh（D）血型鑒定的結(jié)果均呈陽性。對(duì)這500例新生兒的母親進(jìn)行Rh（D）血型鑒定的結(jié)果顯示，其中鑒定結(jié)果呈陽性的新生兒母親有498例，鑒定結(jié)果呈陰性的新生兒母親有2例。

2.2 采用微柱凝膠法對(duì)這500例新生兒進(jìn)行溶血三項(xiàng)試驗(yàn)的結(jié)果

采用微柱凝膠法對(duì)這500例新生兒進(jìn)行溶血三項(xiàng)試驗(yàn)的結(jié)果顯示，試驗(yàn)結(jié)果呈陽性的新生兒有454例，陽性檢出率為90.8%；其中進(jìn)行直接抗人球蛋白試驗(yàn)的結(jié)果呈陽性的新生兒有58例，陽性檢出率為11.6%；進(jìn)行游離抗體試驗(yàn)的結(jié)果陽性的新生兒有268例，陽性檢出率為53.6%；進(jìn)行抗體釋放試驗(yàn)的結(jié)果呈陽性的新生兒有454例，陽性檢出率為90.8%。在這500例新生兒中，A型血新生兒和B型血新生兒中進(jìn)行溶血三項(xiàng)試驗(yàn)結(jié)果呈陽性的新生兒所占的比例相比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。詳見表1。

表1 采用微柱凝膠法對(duì)這500例新生兒進(jìn)行溶血三項(xiàng)試驗(yàn)的結(jié)果[例（%）]

3 討論

HDN是臨床上常見的一種新生兒疾病。此病的發(fā)病原因主要是母體內(nèi)的同種免疫抗體——免疫球蛋白G（IgG）經(jīng)過胎盤進(jìn)入胎兒的血液循環(huán)，與胎兒血液中的紅細(xì)胞結(jié)合，引起免疫性溶血反應(yīng)。有研究指出，對(duì)發(fā)生貧血或HDN風(fēng)險(xiǎn)較高的孕婦進(jìn)行胎兒宮內(nèi)輸血術(shù)等能降低其HDN的發(fā)生率，但不能避免其發(fā)生HDN[2]。對(duì)新生兒進(jìn)行溶血三項(xiàng)試驗(yàn)是臨床上診斷其是否發(fā)生HDN最準(zhǔn)確的方法。有研究指出，進(jìn)行溶血三項(xiàng)試驗(yàn)不僅能評(píng)估新生兒是否發(fā)生溶血，還可為判斷HDN是否惡化提供有力的依據(jù)[3]。溶血三項(xiàng)試驗(yàn)包括直接抗人球蛋白試驗(yàn)、抗體釋放試驗(yàn)和游離抗體試驗(yàn)。進(jìn)行直接抗球蛋白試驗(yàn)主要是通過抗球蛋白試劑直接與紅細(xì)胞上吸附的不完全抗體相結(jié)合，在致敏紅細(xì)胞間搭橋，形成凝集，來檢測新生兒血液中的紅細(xì)胞是否受到抗體致敏。進(jìn)行直接抗球蛋白試驗(yàn)的結(jié)果呈陽性可提示新生兒血液中存在免疫性抗體IgG，導(dǎo)致其紅細(xì)胞致敏。進(jìn)行游離抗體試驗(yàn)主要是針對(duì)新生兒血液中是否存在與其紅細(xì)胞不匹配的ABO外抗體和（或）IgG 抗-A（B）進(jìn)行檢測，進(jìn)而明確其有無HDN。抗體釋放試驗(yàn)是指通過某種方法將血液中的致敏紅細(xì)胞抗體釋放出來，并用已知抗原的紅細(xì)胞來確定釋放液中抗體的特異性，進(jìn)而得出試驗(yàn)結(jié)果。本研究的結(jié)果顯示，在這500例新生兒中，A型血新生兒和B型血新生兒中進(jìn)行溶血三項(xiàng)試驗(yàn)結(jié)果呈陽性的新生兒所占的比例相比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。這說明，新生兒的A、B血型與其發(fā)生新生兒ABO溶血病無關(guān)。這一結(jié)果與蔡大鳳等[4]的報(bào)道基本一致。但秦華等[5]報(bào)道稱，A型血的新生兒HDN的發(fā)生率高于B型血的新生兒。陳陸飛等[6]報(bào)道稱，B型血的新生兒HDN的發(fā)生率高于A型血的新生兒。導(dǎo)致這一情況出現(xiàn)的原因可能是研究對(duì)象所在的區(qū)域不同，其血型基因頻率分布存在差異。本研究的結(jié)果顯示，進(jìn)行直接抗人球蛋白試驗(yàn)的陽性檢出率為11.6%，進(jìn)行游離抗體試驗(yàn)的陽性檢出率為53.6%，進(jìn)行抗體釋放試驗(yàn)的陽性檢出率為90.8%。這說明，在溶血三項(xiàng)試驗(yàn)中，進(jìn)行抗體釋放試驗(yàn)的陽性檢出率最高。一旦進(jìn)行抗體釋放試驗(yàn)的結(jié)果呈陽性，不論其他兩項(xiàng)試驗(yàn)的結(jié)果如何，都可以確定新生兒發(fā)生HDN。導(dǎo)致直接抗人球蛋白試驗(yàn)陽性檢出率偏低的原因可能是新生兒的紅細(xì)胞中攜帶的抗原表位數(shù)只有成人的1/2～1/4，因此結(jié)合抗體的致敏紅細(xì)胞較少[7]。微柱凝膠法是將抗原抗體反應(yīng)與凝膠層析技術(shù)相結(jié)合的一種檢測方法。用微柱凝膠法進(jìn)行溶血三項(xiàng)試驗(yàn)具有操作簡單、方便、標(biāo)本用量少、結(jié)果準(zhǔn)確易判斷、診斷的敏感性高、特異性強(qiáng)、受人為因素影響小、與臨床診斷的符合率高等優(yōu)點(diǎn)[8]。另外，采用微柱凝膠法進(jìn)行溶血三項(xiàng)試驗(yàn)還可直觀地觀察檢測結(jié)果，無需借助顯微鏡進(jìn)行觀察。在同類研究中，張?jiān)伔糩9]和趙冬梅[10]均認(rèn)為與采用試管法進(jìn)行溶血三項(xiàng)試驗(yàn)相比，采用微柱凝膠法進(jìn)行溶血三項(xiàng)試驗(yàn)的陽性檢出率和診斷的準(zhǔn)確率均更高。

綜上所述，采用微柱凝膠法進(jìn)行溶血三項(xiàng)試驗(yàn)診斷新生兒溶血病的效果較好，可在臨床上推廣應(yīng)用。但本研究也存在一定的不足之處（如樣本量少、結(jié)果未引用客觀性指標(biāo)進(jìn)行評(píng)價(jià)及研究的時(shí)間短等），在今后的研究中我們將進(jìn)一步加大樣本量，在結(jié)果中引用具有說服力的指標(biāo)，并延長研究時(shí)間，以進(jìn)一步證實(shí)本研究結(jié)論。