多個腫瘤標志物聯合檢測診斷非小細胞肺癌的價值

閆 飛, 馬艷寧, 宋 燕, 劉雪凱

(1. 航天中心醫院 檢驗科, 北京, 100049; 2. 中國人民解放軍總醫院 檢驗科, 北京, 100039)

肺癌是世界范圍內發病率和致死率較高的惡性腫瘤，已經逐漸發展成為嚴重的公共衛生健康問題和社會問題[1-2]。肺癌按組織形態學可以分為非小細胞肺癌(NSCLC)和小細胞肺癌，其中NSCLC約占85%以上[3]。肺癌早期癥狀不明顯，確診時多為晚期。晚期肺癌患者的5年生存率僅為5%，而早期肺癌的5年生存率可達57%[4]。因此，早發現、早治療對延長肺癌患者生存時間及改善預后極為重要。臨床上常采用血清腫瘤標志物對肺癌患者進行診斷，但不同的腫瘤標志物對不同類型肺癌的診斷靈敏度和特異度各不相同[5]。研究[6]報道在早期肺癌患者血清中可以檢測到循環腫瘤細胞(CTCs)，而葉酸受體則是外周血CTCs的理想靶點，可用于多種實體瘤的早期診斷。本研究探討檢測葉酸受體陽性循環腫瘤細胞(FR+-CTCs)、神經元烯醇化酶(NSE)、細胞角蛋白19片段(CYFRA21-1)在NSCLC診斷中的價值，現將結果報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取本院2019年1月—2020年8月呼吸內科收治的150例NSCLC患者為NSCLC組，其中男110例，女40例，平均年齡(62.30±13.20)歲。納入標準: ① 年齡20～80歲者; ② 符合2018年版《NCCN非小細胞肺癌診斷指南》[7]的診斷標準者; ③ 初次發病，未進行放化療治療者。排除標準: ① 合并重要臟器疾病或其他惡性腫瘤者; ② 合并心腦血管疾病者; ③ 妊娠期女性。根據肺癌TNM分期標準[8]分為Ⅰ期50例, Ⅱ期51例, Ⅲ期39例, Ⅳ期10例。選取100例肺部良性病變患者作為良性病變組，其中男70例，女30例，平均年齡(61.20±12.70)歲; 良性病變均經影像學及組織病理學確診，患者既往無惡性腫瘤史。選取體檢中心健康體檢者100例為對照組，其中男70例，女30例，平均年齡(61.80±13.00)歲; 受試者身心健康，無既往肺部疾病史。3組受試者年齡、性別分布比較，差異無統計學意義(P>0.05), 具有可比性。本研究經醫院倫理委員會批準，所有研究對象知情同意。

1.2 檢測方法

所有研究對象均空腹抽取靜脈血2管，一管加入乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝血3 mL, 另一管無添加劑干燥真空管3 mL。FR+-CTCs檢測方法: 在獲得EDTA抗凝血3 mL血樣后，采用免疫磁珠負向富集法捕獲CTCs, 應用配體靶向聚合酶鏈式反應(PCR)檢測FR+-CTCs。儀器為美國ABI7300實時定量PCR儀，采用格諾思博生物科技公司生產的試劑盒。在3 mL血液中檢測到1個FR+-CTCs即判斷為1 FU，陽性判斷標準為≥8.7 FU。NSE、CYFRA21-1檢測方法: 儀器為貝克曼DXI-800全自動免疫分析儀，采用配套試劑盒。NSE>16.5 ng/mL、CYFRA21-1>3.3 ng/mL為陽性。所有檢測項目均嚴格按照試劑盒說明書及標準操作規程進行。

1.3 統計學處理

2 結 果

2.1 3組FR+ -CTCs、NSE、CYFRA21-1水平比較

NSCLC組FR+-CTCs、NSE、CYFRA21-1水平高于良性病變組、對照組，良性病變組FR+-CTCs、NSE、CYFRA21-1水平高于對照組，差異均有統計學意義(P<0.05), 見表1。

表1 3組FR+-CTCs、NSE、CYFRA21-1水平比較

2.2 不同TNM分期NSCLC患者相關指標陽性率比較

在TNM分期Ⅰ、Ⅱ期NSCLC患者中, FR+-CTCs陽性率高于NSE、CYFRA21-1陽性率，差異有統計學意義(P<0.05), 見表2。

表2 不同TNM分期NSCLC患者相關指標陽性率比較[n(%)]

2.3 不同臨床病理特征NSCLC患者FR+-CTCs、NSE、CYFRA21-1水平比較

分析150例NSCLC患者臨床病理特征發現, TNM分期為Ⅲ期及Ⅳ期、鱗癌、分化程度低、有淋巴結轉移的患者FR+-CTCs、NSE、CYFRA21-1水平分別高于Ⅰ期及Ⅱ期、腺癌、分化程度高、無淋巴結轉移的患者，差異有統計學意義(P<0.05), 見表3。

表3 不同臨床病理特征NSCLC患者FR+-CTCs、NSE、CYFRA21-1水平比較

2.4 FR+-CTCs、NSE、CYFRA21-1對NSCLC患者的診斷效能分析

ROC曲線分析結果提示，聯合檢測的AUC、敏感度、特異度依次為0.938、90.1%、84.6%，均較單獨檢測具有更高的診斷效能，差異有統計學意義(P<0.05), 見表4。

表4 FR+-CTCs、NSE、CYFRA21-1對NSCLC患者診斷效能分析

3 討 論

肺癌已成為中國城市人口首要的惡性腫瘤死亡原因，且80%以上為NSCLC[9]。NSCLC生長較慢、轉移較晚，早期癥狀不明顯，大多數患者就診時已出現不同程度、部位的轉移，無法進行手術治療，導致晚期患者生存率低。

FR+-CTCs是近年來發現的新型腫瘤標志物。CTCs是由實體腫瘤或轉移病灶釋放入血，隨著腫瘤細胞的浸潤和轉移時，部分腫瘤細胞可以通過結締組織間隙或破裂的毛細血管進入血液循環[10]。葉酸是人體必需的維生素，主要從外界攝取，通過與細胞表面葉酸受體結合而進入細胞。葉酸受體在多種腫瘤細胞中高度表達，尤其是卵巢癌和肺癌，正常人機體中表達極低，葉酸受體已經成為檢測CTCs的理想靶點[11]。NSE是一種糖酵解酶，主要分布于人體神經元和神經內分泌細胞內，在周圍型NSCLC中顯著升高[12]。但NSE在良性病變中也會出現高表達，因此存在一定假陽性。CYFRA21-1是細胞角蛋白家族的重要成員，在惡性腫瘤細胞的增殖過程中以外分泌的形式進入血液循環，在肺癌中可高度表達[13]。

本研究發現NSCLC患者的FR+-CTCs、NSE、CYFRA21-1水平顯著升高，說明這些標志物與肺癌的發生、發展密切相關，與研究[14]結果相近。FR+-CTCs、NSE、CYFRA21-1聯合檢測的診斷效能明顯提高，彌補了單獨檢測的各項不足，提高了肺癌早期檢測的診斷效能。本研究還發現, FR+-CTCs在早期肺癌中具有更高的檢出率，可能與腫瘤細胞釋放入血而早期臨床癥狀還不明顯有關。本研究還顯示, TNM分期為Ⅲ期及Ⅳ期、鱗癌、分化程度低、有淋巴結轉移的患者FR+-CTCs、NSE、CYFRA21-1水平明顯升高，因此臨床需積極監測FR+-CTCs、NSE、CYFRA21-1水平以評估癌癥進展情況，為臨床治療提供參考。

綜述所述, FR+-CTCs在NSCLC早期具有較高的檢出率, FR+-CTCs、NSE、CYFRA21-1聯合檢測可以進一步提高診斷效能，對NSCLC的早期診斷具有重要意義。