耳葉黑柴胡的生藥學(xué)鑒別研究

張 妤，郝 娟，蔡翠芳

(1.山西藥科職業(yè)學(xué)院，山西 太原 030031；2.山西省太原市食品藥品檢驗(yàn)所，山西 太原 030001)

耳葉黑柴胡(Bupleurum smithii var. Auriculatum)[1]為傘形科多年生草本植物，主要分布于山西忻州地區(qū)[2]，以寧武、神池、岢嵐等地較為多見(jiàn)，生長(zhǎng)于海拔1500～2400 m的山坡草地、路旁、疏林等地。耳葉黑柴胡中文名出自于《植物分類學(xué)報(bào)》1974版，由于與柴胡(Bupleurum Radix)分布區(qū)域相近，外觀形態(tài)相似，致使山西多地區(qū)誤將耳葉黑柴胡采集加工作柴胡入藥。至今未見(jiàn)有對(duì)耳葉黑柴胡藥材的系統(tǒng)研究報(bào)道。為澄清藥源，本試驗(yàn)對(duì)耳葉黑柴胡的性狀、顯微、薄層色譜進(jìn)行較為系統(tǒng)的研究，為其區(qū)分柴胡和耳葉黑柴胡提供依據(jù)，也為耳葉黑柴胡的開(kāi)發(fā)利用提供參考。

1 實(shí)驗(yàn)儀器與材料

1.1 儀器

奧林巴斯DP73顯微鏡；KQ-250DE型數(shù)控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)；DE-200g高速萬(wàn)能粉碎機(jī)(浙江紅景天工貿(mào)有限公司)；梅特勒ML503電子天平；硅膠G薄層板(青島海洋化工廠)。

1.2 材料

耳葉黑柴胡10批樣品采集于山西省寧武縣、神池縣、岢嵐縣，見(jiàn)表1，經(jīng)山西藥科職業(yè)學(xué)院蔡翠芳教授鑒定，為耳葉黑柴胡Bupleurum smithii var. Auriculatum 的干燥根和根莖。所采集標(biāo)本均保存于山西藥科職業(yè)學(xué)院生藥標(biāo)本室；柴胡皂苷a、d對(duì)照品從山西省藥品檢驗(yàn)所(中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào):110777-201711，110778-201711)購(gòu)買；其余試劑均為分析純。

表1 耳葉黑柴胡樣品采集信息

2 實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果

2.1 性狀鑒別

耳葉黑柴胡根多呈圓錐形，主根長(zhǎng)1～5cm，直徑0.2～0.6cm，略彎曲，多無(wú)分枝。根莖近圓形，較長(zhǎng)，有稀疏的不定芽，多排成2列。頂端常殘留莖基1～5個(gè)，表面黑褐色，有縱溝，粗糙。具突起的支根痕，皮孔狀突起不明顯。質(zhì)稍軟，容易折斷。耳葉黑柴胡斷面較平坦，皮部呈淡棕色，木部呈黃白色，味微苦辛。

2.2 顯微鑒別

常規(guī)徒手切片。將耳葉黑柴胡根、根莖橫切面切成薄片置于載玻片上，逐滴加入水合氯醛試液并加熱處理，透化后，濃鹽酸、間苯三酚染色，滴加稀甘油，蓋上蓋玻片，備用。將藥材粉碎(40目篩)，水合氯醛裝片，備用。

2.2.1根橫切面

主根類圓柱形。木栓層為10～70余列細(xì)胞；木栓細(xì)胞呈扁平長(zhǎng)方形，木栓形成層2～3列細(xì)胞，細(xì)胞扁平，長(zhǎng)徑約為短徑4倍。栓內(nèi)層有4～7層切向延長(zhǎng)的薄壁細(xì)胞，油室斷續(xù)排列成2層，油室周圍分泌細(xì)胞多為6個(gè)，近圓形，可見(jiàn)少量黃色油狀物。韌皮部較窄，其中油室較多，常連成帶狀，排列成2～6層，內(nèi)含黃色油狀物。形成層成凹凸不平的環(huán)，不甚明顯。木質(zhì)部呈放射狀，導(dǎo)管多數(shù)，直徑8～54μm,大型導(dǎo)管2～3個(gè)呈切向排列，小型導(dǎo)管1～2號(hào)個(gè)呈徑向排列。

1.木栓層 2.油管 3.皮層 4.韌皮部 5.形成層 6.木質(zhì)部 7.導(dǎo)管

2.2.2根莖橫切面

根莖木栓層為20～45余列扁平細(xì)胞，木栓形成層2～3列細(xì)胞，細(xì)胞扁平，長(zhǎng)徑約為短徑4倍。栓內(nèi)層內(nèi)側(cè)薄壁細(xì)胞切向延長(zhǎng)，多為3～7層，油管斷續(xù)排列成2層，油管周圍分泌細(xì)胞多為6～15個(gè)，內(nèi)含黃色油狀物。韌皮部中可見(jiàn)油管分布，油管周圍分泌細(xì)胞多為6～15個(gè)，多數(shù)可見(jiàn)其中黃色油狀物。形成層成成凹凸不平的環(huán)，不甚明顯。木質(zhì)部呈放射狀排列，導(dǎo)管明顯。髓部較窄，由多個(gè)薄壁細(xì)胞組成，多破裂。

1.木栓層 2.皮層 3.油管 4.韌皮部 5.形成層 6.木質(zhì)部 7.髓

2.2.3藥材粉末

耳葉黑柴胡的粉末為棕褐色；木纖維3～6μm，散在；油管多，60～118μm，含淡黃色條狀分泌物；導(dǎo)管多為網(wǎng)紋，直徑11～33μm；木栓細(xì)胞黃棕色，長(zhǎng)34～64μm，寬20～27μm，表面觀呈類長(zhǎng)方形或多角形，壁稍厚。

a.網(wǎng)紋導(dǎo)管(×400)

2.3 薄層色譜鑒別[3]

取上述10批耳葉柴胡、北柴胡對(duì)照藥材各0.5g，加入20mL的甲醇，超聲(200W，40kHz)處理10min。將超聲后的濾液濾過(guò)，并濃縮濾液至5mL；另取試驗(yàn)對(duì)照品柴胡皂苷a、d，加甲醇制成對(duì)照品混合溶液(0.5mg/mL)。依據(jù)中國(guó)藥典(2020年版)薄層色譜法(通則0502)試驗(yàn)[4]，吸取耳葉柴胡、北柴胡對(duì)照藥材、對(duì)照品混合溶液各5μL，點(diǎn)于硅膠G薄層板上，將以8∶2∶1比例的乙酸乙酯-乙醇-水作為展開(kāi)劑展開(kāi)[5]，展開(kāi)后取出，晾干，以2%對(duì)二甲氨基苯甲醛的40%硫酸溶液作為其顯色劑，并在60℃加熱處理直至斑點(diǎn)顯色清晰[5]，隨后在波長(zhǎng)為365nm紫外光燈下檢視。10批耳葉黑柴胡的薄層色譜與對(duì)照品位置基本一致，顯相同斑點(diǎn)，與北柴胡薄層色譜存在顯著差異。

a.柴胡皂苷a、d對(duì)照品 1～10.10批耳葉黑胡 11.北柴胡

3 討論

耳葉黑柴胡性狀鑒別要點(diǎn)：根呈圓錐形，多無(wú)分枝。表面黑褐色，粗糙。皮孔狀突起不明顯。頂端殘留莖基1～5個(gè)，質(zhì)稍軟，易折斷，斷面較平坦，皮部呈淺棕色，木部呈淡黃白色，味微苦辛。顯微鑒別要點(diǎn)：根、根莖木栓層均是排列整齊緊密、扁平長(zhǎng)方形木栓細(xì)胞。油管斷續(xù)排列成2層，油管周圍分泌細(xì)胞多為6個(gè)，形成層成凹凸不平的環(huán)，不甚明顯。網(wǎng)紋導(dǎo)管多見(jiàn)。薄層色譜以配比為8∶2∶1的乙酸乙酯-乙醇-水作為其展開(kāi)劑，10批樣品在相應(yīng)的位置上顯相同斑點(diǎn)，且與北柴胡薄層色譜存在顯著差異。

耳葉黑柴胡在我省神池、寧武等縣藥用已有200多年的歷史[6]，本試驗(yàn)從忻州地區(qū)采集了10批供試品使用現(xiàn)代儀器對(duì)其原植物形態(tài)、藥材性狀及顯微進(jìn)行詳細(xì)對(duì)比研究，為鑒別耳葉黑柴胡與北柴胡提供依據(jù)。特別是隨著柴胡野生資源逐漸減少，兩種藥材能否互相替代使用還需進(jìn)一步探討研究。