中晚期肝癌患者TACE治療后外周血中lncRNA-ANRIL的表達水平與患者預后相關性分析

張洪宇,芮雅寶,李 軍,陸 通,王燮辰,蒲艷軍,王旭垠,閆 蕾

原發性肝癌是常見的一種惡性腫瘤，發病率呈上升趨勢，且具有較高病死率，嚴重威脅患者生命健康、影響患者生活質量[1]。原發性肝癌早期癥狀較為隱匿，潛伏時間長，發現時通常已屬中晚期，大部分失去最佳手術治療時機。而經導管肝動脈化療栓塞術(TACE)成為中晚期肝癌主要治療方法，其在延長患者生存期、抑制腫瘤生長等方面有良好療效[2-3]。近年來研究發現，長鏈非編碼RNA(lncRNA)與癌癥發生、發展及轉移關系緊密，而尚無有關長鏈反義非編碼RNA(lncRNA-ANRIL)與肝癌關系的報道[4]。本文通過分析中晚期肝癌患者TACE治療后外周血中lncRNA-ANRIL的表達與患者預后相關性，以期為改善患者預后提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料:選擇我院于2015年1月-2019年1月收治的中晚期肝癌患者97例，符合《原發性肝癌診療規范(2011版)》[5]診斷標準，且均行TACE術治療。納入標準：①經臨床表現、影像學及病理學證實為原發性肝癌，且TNM分期為Ⅲb-Ⅳ期；②符合TACE術指征，且臨床資料完整；③獲得知情同意。排除標準：①轉移性肝癌、血管瘤及其他惡性腫瘤者；②TACE術禁忌者；③術前合并急慢性感染者或凝血功能障礙者；④精神疾病者；⑤妊娠或哺乳期婦女。納入的97例患者中，男性59例，女性38例；年齡31～78歲，平均年齡(56.73±8.97)歲；體質指數(BMI)22.41±1.28 kg/m2；TNM分期：Ⅲb期56例，Ⅳa期28例，Ⅳb期13例。受試者均經醫院倫理委員會批準。

1.2 方法:所有患者均行TACE術治療，具體方法：穿刺點選取患者右側腹股溝下方韌帶中點下1～2 cm處，以Selding穿刺及時，經肝總動脈、腹主動脈及股動脈將5F導管超選擇至腫瘤供血動脈，固定導管頭端，注入700 mg 5-氟尿嘧啶、40 mg表阿霉素、80 mg順鉑與5～30 mL碘化油乳劑充分混合成化療藥碘化油乳劑，行腫瘤血管栓塞。術后進行常規營養支持、補液等治療。

1.3 預后評價:所有患者均隨訪至2020年1月31日，觀察患者總體生存時間和無進展生存時間，以死亡或隨訪末為終點，其中以復發、轉移和死亡為預后不良，反之為預后良好。

1.4 觀察指標:①觀察術前、術后7 d和術后1個月肝功能變化，分別于術前、術后7 d和術后1個月清晨空腹采集3 mL外周靜脈血，離心半徑10 cm，3 000 r/min，離心12 min，取上清液，采用Dxc 800TB全自動生化儀測定肝功能指標總膽紅素(TBIL)、直接膽紅素(DBIL)、谷草轉氨酶(AST)和谷丙轉氨酶(ALT)水平。②觀察術前、術后7 d和術后1個月外周血lncRNA-ANRIL表達，分別于術前、術后7 d和術后1個月清晨空腹采集3 mL外周靜脈血，采用一步法總RNA提取試劑Trizol(美國Invitrogen公司)提取總RNA，且逆轉錄為cDNA，進行實時熒光定量RCR(RT-PCR)。使用primer 6.0軟件設計引物，RT-PCR反應，95 ℃反應30 s，35個循環；設定95 ℃ 10 s、60 ℃ 30 s。采用2-△△Ct計算相對表達量。具體引物見表1。③觀察不同預后情況外周血中lncRNA-ANRIL表達水平。④GAPDH是糖酵解反應中的一個酶，其在組織中一般都高水平表達且表達量相對恒定，被用作該實驗操作的標準化內參。

表1 具體引物

2 結果

2.1 術前、術后7 d和術后1個月肝功能變化比較:術前血清TBIL、DBIL、AST和ALT水平比較差異無統計學意義(P>0.05)；術后7 d和術后1個月血清TBIL、DBIL、AST和ALT水平較術前升高，而術后1個月低于術后7 d(P<0.05)，見表2。

表2 術前、術后7 d和術后1個月肝功能變化比較

2.2 術前、術后7 d和術后1個月外周血lncRNA-ANRIL表達比較:術前外周血lncRNA-ANRIL表達比較差異無統計學意義(P>0.05)；術后7 d和術后1個月外周血lncRNA-ANRIL表達較術前降低，且術后1個月低于術后7 d(P<0.05)。見表3。

表3 術前、術后7d和術后1個月外周血lncRNA-ANRIL表達比較

2.3 預后情況:所有患者均隨訪至2020年1月31日，隨訪12～60個月。平均總生存期為38.83個月(見圖1，目錄后)。根據預后情況分為預后良好組52例(53.61%)與預后不良組45例(46.39%)。

2.4 不同預后情況外周血lncRNA-ANRIL表達比較:預后良好組外周血lncRNA-ANRIL表達低于預后不良組(P<0.05)，見表4。

表4 不同預后情況外周血lncRNA-ANRIL表達比較

3 討論

正常肝臟組織主要由門靜脈供血，占75%以上；肝癌主要由其所在的肝葉動脈供血，占95%左右。因此，選擇性阻斷肝動脈可使腫瘤組織缺血、壞死。腫瘤生長過大或多發、跨葉時通常需接受多支供血，有時也會由于主要供血動脈被栓塞而通過側支循環供血。故而，臨床上采用經肝動脈治療能夠在區域范圍內將肝癌細胞有效殺滅且對非瘤肝組織影響較小[6]。TACE作為一種介入姑息治療手段，將化療藥物主要通過介入方法直接注入腫瘤供血動脈中，并應用碘化油乳化進行栓塞，使肝動脈供血阻斷，維持腫瘤病灶局部較高藥物濃度，從而促進腫瘤病灶縮小和腫瘤細胞壞死[7]。本文研究表明，術后7d和術后1個月血清TBIL、DBIL、AST和ALT水平較術前升高而術后1個月低于術后7d，提示TACE治療后，可短暫導致患者肝功能損害，且逐漸出現好轉，認為TACE導致肝功能損害的機制可能是由于TACE治療腫瘤同時造成非腫瘤組織缺血缺氧及缺血后再灌注損傷，導致自由基介導的肝細胞損傷；且應用大劑量化療藥物灌注入肝臟中，從而使部分化療藥物進入癌變組織旁的非癌區難以避免，不同程度殺傷正常肝細胞。隨著近年來臨床上微導管的使用，TACE對肝功能損傷明顯減輕。

lncRNA成為近年來研究熱點，主要是長度200個堿基且不具備編碼蛋白功能的一類RNA分子。研究表明，許多lncRNA在多種腫瘤發生、發展、侵襲及轉移過程中發揮作用[8-10]。lncRNA已被證實在肝癌、胃癌等消化系統腫瘤中診斷價值較大。Ma等[11]學者研究報道顯示，ANRIL能夠通過街道上皮細胞-間充質轉化的發生，促進肝癌轉移。Lan等[12]學者研究報道顯示，ANRIL能夠通過表皮生長因子受體依賴性信號通過，促進胃癌侵襲-轉移級聯反應及促進胃癌細胞生長，且胃癌組織中ANRIL表達高于正常組織。本文研究表明，術后7d和術后1個月外周血lncRNA-ANRIL表達較術前降低，且術后1個月低于術后7d，預后良好組外周血lncRNA-ANRIL表達低于預后不良組，提示TACE治療后可下調外周血lncRNA-ANRIL表達，且與預后密切相關。

綜上所述，中晚期肝癌患者TACE治療后外周血lncRNA-ANRIL表達降低，且與預后密切相關，預后越差lncRNA-ANRIL表達越高。