五味子乙素下調IGFBP2表達抑制吉非替尼耐藥肺癌細胞增殖

孫蕾，藍秀，呂祝慶，李偉文

溫州醫科大學附屬第五醫院 呼吸內科，浙江 麗水 323000

肺癌是世界范圍內發病率和病死率最高的惡性腫瘤，嚴重威脅人類健康，其中，非小細胞肺癌（non-small cell lung cancer，NSCLC）是最常見的惡性腫瘤，占肺癌的85%以上，大部分患者確診時已為晚期，治療效果不佳，5年生存率僅為17.1%[1]。吉非替尼（gefitinib，Gef）的應用顯著延長了患者無進展期和生存期，但極易耐藥[2]。五味子乙素（Schisandrin B，Sch B）是一種具有廣譜抗癌作用的中藥單體[3]，不僅能夠誘導腫瘤細胞凋亡、抑制細胞增殖[4]，還能抵抗多種抗腫瘤藥物（如多西他賽、阿霉素）的耐藥性[5-7]。然而，Sch B能夠緩解吉非替尼耐藥的作用及其機制仍未明確。胰島素樣生長因子結合蛋白2（insulin-like growth factor binding protein 2，IGFBP2）在肺癌組織中呈高表達，與腫瘤細胞的增殖、遷移、轉化等惡性生物行為密切相關[8]。也有研究報道IGFBP2與埃羅替尼、達沙替尼等藥耐藥有關[9]，IGFBP2 可能是緩解吉非替尼耐藥的關鍵靶點。因此，本研究觀察Sch B對Gef耐藥的PC9（PC9/GR）細胞增殖、凋亡的影響，并探討IGFBP2在Sch B抑制PC9/GR細胞增殖中的作用。

1 材料和方法

1.1 試劑 Sch B（＞98%，相對分子質量：400.4648， 貨號：S117968）購自美國阿拉丁公司，杜爾伯科改良伊格爾培養基（DMEM，貨號：11965118）、青霉素-鏈霉素雙抗（貨號：15140148）、胎牛血清（FBS，貨號：10091155）、胰蛋白酶（貨號：25300054）購自美國Gibco公司，3-（4，5-二甲基噻唑-2）-2，5-二苯基四氮唑溴鹽（MTT，貨號：M5655）、二甲亞砜（貨號：D2650）購自美國Sigma公司；IGFBP2（貨號：3922）、p-AKT（貨號：4060）、AKT（貨號：4685）、p-mTORC1（貨號：5536）、mTORC1（貨號：2587）和β-actin（貨號：4970）單克隆抗體購自美國Cell Signaling Technology公司。

1.2 細胞培養與馴化 將人肺癌PC9細胞（ATCC細胞庫）培養種植于含10% FBS、100 U/mL青霉素、100 μg/mL鏈霉素的DMEM，取對數生長期細胞進行實驗。采用濃度遞增法構建Gef耐藥的細胞，使PC9能在含有200 nmol/L的Gef培養基中穩定存活，建立PC9獲得性耐藥細胞（PC9/GR）。……