受甲基化調控的lncRNA在乳腺癌中的表達譜及意義

胡倩，藍曉珊，林穎欣，陳秀云，丁林瀟瀟，龐丹梅

1.佛山市第一人民醫院 腫瘤中心，廣東 佛山 528000；2.中山大學孫逸仙紀念醫院 乳腺醫學部，廣東 廣州 510120

據報道乳腺癌是全世界女性最常見的惡性腫 瘤[1-2]。表觀遺傳修飾在乳腺癌的發生發展過程中發揮重要作用[3-4]。外界環境因素如藥物、飲食、生活習慣能直接影響表觀遺傳學修飾，如DNA甲基化、組蛋白乙?；萚3-5]。腫瘤的發生發展和原癌基因的異常低度甲基化與抑癌基因的異常高度甲基化有關[6]。長鏈非編碼RNA（long non-coding RNA，lncRNA）也是表觀遺傳學修飾一種方式[7-8]。本研究采用高通量lncRNA芯片技術和實時熒光定量PCR（Real-time quantitative polymerase chain reaction，qRT-PCR）篩選受甲基化水平影響的 lncRNA分子，分析其可能對乳腺癌的發生發展所發揮的調控作用。

1 材料和方法

1.1 細胞株 采用三株人乳腺癌細胞株BT549、MB231 和BT474 以及人正常永生化乳腺上皮細胞MCF10A。BT549、MB231細胞株的表型為三陰型，而BT474細胞株表型為上皮型。BT549、BT474及MB231細胞培養于10%胎牛血清的DMEM低糖培養基，人正常永生化乳腺上皮細胞株MCF10A培養于含5%馬血清、10 μg/mL胰島素、20 μg/mL表皮生長因子、100 μg/mL霍亂毒素、0.5 μg/mL氫化可的松的DMEM/F12培養基，置于37 ℃、5% CO2恒溫細胞培養箱，待細胞培養至80%～90%融合時移去舊培養基，使用1 mL 0.25%胰酶消化傳代。根據文獻報道及預實驗結果，本研究利用上皮型BT474乳腺癌以去甲基化藥物5-氮雜胞苷（5’aza-deoxycytidine，sigma）5 μmol/L的處理72 h，每24 h換液，獲得乳腺癌細胞去甲基化處理株[9]。細胞株均購置于ATCC細胞保藏中心。

1.2 乳腺癌組織標本 選取2019年6月佛山市第一人民醫院符合病理診斷的20例乳腺癌患者。20例患者均為女性，年齡38～70歲，中位年齡50歲?！?br>