神經系統SARM1條件性敲除小鼠的構建及其應用

項魯丹，孫煥坤，吳仟，汪偉，黃智慧，于欣

1.溫州醫科大學 精神醫學學院，浙江 溫州 325035；2.杭州師范大學 藥學院，浙江 杭州 311121

SARM1（sterile alpha and TIR motif containing 1）蛋白是TLR（Toll-like receptor）5個接頭蛋白中的一個[1-2]，由MINK等[3]于2001年首次報道。SARM1蛋白高表達于神經元[4]，在中樞神經系統中發揮著重要作用，是軸突變性的關鍵因 子[5]，既參與腦內的先天免疫[4]，又調控神經元形態[6]和凋亡[7]。除此之外，SARM1亦影響神經元的突觸反應和突觸后蛋白表達水平[8]。因此，SARM1與神經系統的發育和功能密切相關。

然而既往對于SARM1基因功能的研究均是在RNA干擾（RNAi）或者全身性敲除SARM1基因的基礎上完成的。RNAi和全身性敲除不能特異性地在特定細胞中將基因敲除，大大限制了相關基因蛋白在某些特定細胞中作用的研究。為了更精確地研究SARM1在神經細胞中的作用，本研究采用了ES細胞 （embryonic stem cell）打靶方式構建了SARM1基因條件性敲除（conditional knockout，CKO）小鼠，并將其與神經系統特異性的Nestin-Cre小鼠雜交，最終得到SARM1Nestin-CKO小鼠，并探討SARM1在神經精神系統疾病中的作用。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 實驗動物：SARM1flox/flox小鼠（20～25 g，6～ 8周齡，雌性）和Nestin-Cre工具鼠（20～25 g，6～8周齡，雄性）均由上海南方模式生物科技股份有限公司制備。動物飼養于溫州醫科大學實驗動物中心，動物許可證號：SYXK（浙）2015-0009，本研究獲得溫州醫科大學實驗動物倫理委員會批準。

1.1.2 藥物與試劑：PCR引物購自上海生工生物工程有限公司。蛋白裂解液、蛋白酶抑制劑混合物購自美國Sigma公司。脫脂奶粉購自美國BD公司。1 mol/L Tris-HCl緩沖液（pH=6.8）、1.5 mol/L Tris-HCl（pH=8.8）、30% Acrylamide均購自北京索萊寶有限公司。多聚甲醛購自上海阿拉丁生化科技股份有限公司。兔抗SARM1（ab226930）購自美國Abcam公司，鼠抗β-actin（HC201-01）購自北京全式金生物技術有限公司，鼠抗NeuN（MAB377）購自美國Millipore公司?！?br>