慢性腎臟病大鼠基于RNA-seq的腸道轉錄組學分析

渠 寧 蔣紅利 李 潔 魏麗敏 高凡凡 陳 蕾

慢性腎臟病(CKD)已經成為一個重要的全球公共衛生問題[1]， CKD患者易出現惡心、嘔吐、腹瀉、便秘[2]等消化道癥狀，普遍存在腸道菌群失調和腸道屏障功能受損[3-8]，導致腸道菌群移位[9]、微炎癥狀態[10]和腸源性毒素蓄積[11-12]，增加心血管疾病[13-14]、營養不良[15]等并發癥的發病率，目前研究多聚焦于腸道菌群和腸道屏障，但是著眼于CKD患者腸道廣泛基因表達譜的研究尚不多見。RNA-seq是指利用高通量測序對RNA逆轉錄及PCR擴增得到的cDNA進行分析的技術[16]，本研究通過RNA-seq技術，分析CKD大鼠與假手術組大鼠腸道基因表達譜的差異，探索與差異表達基因相關的生物過程與信號通路，加深對CKD腸道變化的了解，為CKD及其并發癥的治療提供新的思路。

材料與方法

研究對象成年健康雄性Sprague-Dawley大鼠(SPF級)20只，體質量180～220g，購買于西安交通大學實驗動物中心[SCXK(陜)2018-001]，飼養于西安交通大學實驗動物中心[SYXK(陜)2020-001]，溫度25℃±2℃，12h明暗循環，自由飲食和飲水。所有動物實驗均遵照國家實驗動物飼養與使用指南。本項目經西安交通大學醫學院實驗動物倫理委員會批準(項目號：XJTULAC2019-1274)。

動物模型的建立及分組20只大鼠隨機分為假手術(Sham)組和CKD組，各10只。采用5/6腎切除術建立大鼠慢性腎臟疾病模型。CKD組大鼠麻醉后切除左腎約2/3，一周后行二期手術，切除右腎。Sham組大鼠同時進行兩次手術僅切開腎包膜。二期手術后正常飼養28周，CKD組8只大鼠存活，Sham組7只大鼠存活。禁食12h后麻醉，腹主動脈取血，3 000 r/min離心20 min，收集血清后送金域醫學檢驗肌酐、尿素氮及血紅蛋白；……