輪狀病毒感染實驗室診斷研究進展

談偉，陳詠妍，張欣欣

上海交通大學醫學院附屬瑞金醫院臨床病毒研究室, 上海 200025

輪狀病毒屬于呼腸孤病毒科，其顆粒直徑為 70～75 nm，無包膜，雙層衣殼，具有11個節段的雙鏈RNA[1]。輪狀病毒體核心RNA全長約為18.5 kb，編碼11～12個蛋白，其中包括6個結構蛋白(VP1～VP4，VP6，VP7)和5個非結構蛋白(NSP1～NSP4，NSP5/NSP6)。輪狀病毒有10種亞型(輪狀病毒A～J)，其中輪狀病毒A引起的感染占輪狀病毒感染病例的90%以上[2]。在6個結構蛋白中糖蛋白VP7和蛋白酶敏感蛋白VP4位于外衣殼，是輪狀病毒雙重分類系統的依據[3]。在A組輪狀病毒中，根據VP7抗原性不同可分為不同的G血清型，其中G1～G4在人群中最流行；根據VP4抗原性不同可分為不同的P血清型，以P1A型為常見型。在臨床診斷和鑒別中，主要以病毒基因型分型作為診斷依據。G血清型與基因型的表述一致；P血清型與基因型表述不一致，基因型用中括號“[]”表示(如血清型P1A即為基因型P[8]，P1B即為基因型P[4]，P2A即為基因型P[6])。其中6個G型(即G1，G2，G3，G4，G9和G12)和3個P型(P[4]，P[6]和P[8])的輪狀病毒感染率更高[4]。

傳統的輪狀病毒檢測是運用電子顯微鏡(electron microscope，EM)和酶聯免疫吸附試驗(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)檢測輪狀病毒顆粒及其抗原，這類傳統方法繁瑣、檢出率低且耗時很長，已經很少使用。目前，臨床上檢測輪狀病毒主要采用膠體金免疫層析法 (gold immunochromatography assay, GICA)和反轉錄聚合酶鏈反應(reverse transcription polymerase chain reaction，RT-PCR)。GICA滿足了臨床檢測方法應簡單、快速的要求；RT-PCR從基因層面檢測輪狀病毒，具有高特異性、高敏感性的特點。但是，GICA敏感性不足，當病毒載量較低或抗原發生突變時就會出現假陰性；RT-PCR反轉錄合成cDNA操作復雜、容易污染、擴增耗時較長。……