ApoE 基因多態(tài)性對(duì)瑞舒伐他汀療效的影響*

杜海燕，繆 陽(yáng)，張 婷，卞海林，王興科

鹽城市第一人民醫(yī)院藥學(xué)部，鹽城 224000

心血管疾病是我國(guó)人群最主要的致死原因之一，其發(fā)病率和致死率正在逐年上升，血脂異常正是心血管病最重要的危險(xiǎn)因素之一[1]。目前多項(xiàng)大規(guī)模臨床試驗(yàn)結(jié)果一致顯示，HMG-CoA 還原酶抑制劑瑞舒伐他汀鈣在動(dòng)脈粥樣硬化性心血管疾病（atherosclerotic cardiovascular disease，ASCVD）一級(jí)和二級(jí)預(yù)防中均能顯著降低心血管事件（包括心肌梗死、冠心病死亡和缺血性卒中等）危險(xiǎn)[2]，其親和力是其他他汀類藥物的4 倍[3]。但也有不少報(bào)道[4]指出，瑞舒伐他汀無(wú)論是在降低血脂水平、減少臨床事件、還是出現(xiàn)不良反應(yīng)方面,不同個(gè)體之間還是存在著不容忽視的差異。影響療效的因素有很多，目前認(rèn)為參與藥物代謝的酶、轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白、受體和其他藥物靶蛋白的遺傳多態(tài)性，對(duì)藥物的療效和不良反應(yīng)有著很重要的作用，載脂蛋白E（apolipo-protein E，ApoE）基因多態(tài)性是其中重要原因之一[5]。

ApoE 是一種由299 個(gè)氨基酸殘基組成的富含精氨酸的堿性蛋白，主要存在于極低密度脂蛋白（VLDL）、中間密度脂蛋白（IDL）、乳糜微粒（CM）及CM 殘粒中，其參與脂蛋白的構(gòu)成、轉(zhuǎn)化、代謝，是脂類代謝和心血管疾病的決定因子[6]。ApoE 基因具有3 種復(fù)等位基因（E2、E3、E4）分別編碼產(chǎn)生6 種不同的表型：E2/2、E2/3、E3/3、E2/4、E3/4 和E4/4。本文通過(guò)研究血脂異常人群中ApoE 基因多態(tài)性的分布及其對(duì)瑞舒伐他汀調(diào)脂效果的影響，為實(shí)現(xiàn)該藥個(gè)體化用藥提供理論依據(jù)，為臨床合理用藥提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇我院2017 年1 月～2019 年6 月住院的血脂異常的患者127 例，其中男性93 名，女性34 名，平均年齡（60.12±9.72）歲。血脂異常診斷標(biāo)準(zhǔn)：根據(jù)2016 年制定的《中國(guó)成人血脂異常防治指南》[7]，①血清膽固醇（TC）≥6.2 mmol·L-1；②血清甘油三酯（TG）≥2.3 mmol·L-1；③血清高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）≤1.0 mmol·L-1；④低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）≥4.1 mmol·L-1。符合以上四項(xiàng)之一者，則為血脂異常。近期（一個(gè)月內(nèi)）未服用降血脂藥物。排除能引起血脂異常的疾病，如甲狀腺功能異常、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、肝癌、膽道疾病、腎臟疾病等。

1.2 儀器和試劑

Fascan 48E 多通道熒光定量分析儀（西安天隆科技有限公司）；AU5800 全自動(dòng)生化分析儀（貝克曼庫(kù)爾特公司，美國(guó)）。

ApoE 基因測(cè)序反應(yīng)通用試劑盒（批號(hào)1906160V004，西安天隆科技有限公司）；總膽固醇測(cè)定試劑盒（批號(hào)AUZ5625）、甘油三酯測(cè)定試劑盒（批號(hào)AUZ5693）、低密度脂蛋白膽固醇測(cè)定試劑盒（批號(hào)AUZ5660）、高密度脂蛋白膽固醇測(cè)定試劑盒（批號(hào)AUZ5661）均為貝克曼庫(kù)爾特公司產(chǎn)品。

1.3 血脂水平測(cè)定

所有患者測(cè)定TC、TG、HDL-C、LDL-C 等常規(guī)血脂指標(biāo)，每晚服用瑞舒伐他汀鈣片（10 mg/片）1片。服藥前及服藥12 周后，空腹12 h 后清晨抽取靜脈血，檢查常規(guī)血脂指標(biāo)。患者用藥期間避免合用其他調(diào)脂藥物或經(jīng)細(xì)胞色素P450 代謝的藥物。

1.4 ApoE 基因型的測(cè)定

所有患者采集2 mL 靜脈外周血，置于EDTA抗凝管中，采用PCR-熒光探針?lè)▽?duì)血樣進(jìn)行檢測(cè)。將待測(cè)樣本加入適量血液基因組試劑，充分混合后離心提取樣本DNA。取2 μL 待測(cè)樣本的基因組DNA、弱陽(yáng)性對(duì)照、空白對(duì)照，分別加入裝有3 種PCR 反應(yīng)液的反應(yīng)管中，將反應(yīng)管轉(zhuǎn)移到核酸擴(kuò)增區(qū)進(jìn)行上機(jī)檢測(cè)。將準(zhǔn)備好的PCR 反應(yīng)管放置在儀器樣品槽相應(yīng)位置上，設(shè)置儀器擴(kuò)增相關(guān)參數(shù)后進(jìn)行PCR 擴(kuò)增。反應(yīng)結(jié)束后，根據(jù)擴(kuò)增曲線，劃定合適基線和熒光閾值，得到不同通道Ct 值并進(jìn)行結(jié)果判定。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS 22.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示，基因型分布是否符合遺傳Hardy-Weinberg 平衡及多個(gè)樣本率之間的比較采用χ2檢驗(yàn)，兩個(gè)樣本均數(shù)間的比較用t檢驗(yàn)，多個(gè)樣本均數(shù)間的比較用單因素方差分析。P＜0.05 為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 ApoE 基因型與等位基因頻率分布

127 例血脂異常患者共檢出ApoE 2/2 基因型1例（0.79%），E2/3 基因型16 例（12.60%），E3/3 基因型79 例（62.20%），E3/4 基因型29 例（22.83%），E4/4 基因型2 例（1.58%）；E2、E3、E4 3 種等位基因頻率分別占比為7.09%、79.92%、12.99%。

χ2檢驗(yàn)結(jié)果顯示，ApoE 各基因型頻率實(shí)際值與理論值之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=3.051，P=0.692），分布符合Hardy-Weinberg 平衡，說(shuō)明樣本具有群體代表性。

2.2 各基因型患者一般資料的比較

根據(jù)ApoE 不同基因型發(fā)生血脂異常的風(fēng)險(xiǎn)及服用他汀類藥物的療效將其分為3 組[8，9]，分別為E2組：E2/2+E2/3；E3 組：E3/3；E4 組：E4/4+E3/4。E4 組心血管并發(fā)癥（高血壓、糖尿病、冠心病）患病率最高；但3 組不同的基因型在年齡、體重指數(shù)（BMI）及患高血壓、糖尿病、冠心病方面無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。見(jiàn)表1。

2.3 各基因型血脂水平的比較

比較3 組不同基因型患者的血脂水平，見(jiàn)表2。E4 組TC、TG 水平顯著高于E3 組（P＜0.05）；各組間LDL-C、HDL-C 水平無(wú)顯著性差異（P＞0.05）。

表1 各基因型血脂異常患者一般資料的比較

表2 各基因型血脂異常患者血脂水平的比較

2.4 瑞舒伐他汀治療前后各基因型血脂水平的比較

服用瑞舒伐他汀12 周后血脂水平變化可見(jiàn)表3。各基因型TC、TG 及LDL-C 水平均有下降，HDLC 水平均有所提高。瑞舒伐他汀對(duì)E3 組的TG 水平降低作用最強(qiáng)（P＜0.05），但TC、LDL-C 及HDL-C水平各組間變化率相比無(wú)顯著性差異（P＞0.05）。

表3 瑞舒伐他汀治療前后各基因型血脂異常患者血脂水平的比較

3 討論

有研究表明，我國(guó)人群中E3 等位基因?yàn)橐吧停植碱l率＞80%；E2 和E4 為突變型，分布相對(duì)較少，均＜10%[10]。本研究發(fā)現(xiàn)，在血脂異常患者中E3 等位基因分布頻率達(dá)79.92%，與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致。

國(guó)內(nèi)外大量研究表明[11]，ApoE 基因多態(tài)性決定了各型ApoE 結(jié)構(gòu)和功能上的差異，其與相應(yīng)受體的結(jié)合能力以及對(duì)血脂代謝的影響也存在差異。Shatwan IM 等[8]研究了ApoE 基因型與血脂水平的關(guān)系，發(fā)現(xiàn)TC、LDL-C 水平高低依次為E4＞E3＞E2。傅倩晰等[12]也認(rèn)為，E4 等位基因攜帶者血脂水平顯著高于E3 和E2。本研究比較了血脂異常患者各基因型血脂水平，表明E4/4+E3/4 基因型的TC 和TG水平顯著高于E3/3（P＜0.05）；此外，血脂異常患者E4 等位基因分布頻率（12.99%）略高于文獻(xiàn)報(bào)道的正常人群（＜10%）[10]，提示這種頻率分布的差異可能對(duì)血脂異常有一定的影響。

近年來(lái)，國(guó)內(nèi)外關(guān)于阿托伐他汀鈣、氟伐他汀、辛伐他汀等的降脂療效與ApoE 基因多態(tài)性的相關(guān)性報(bào)道較多，多數(shù)研究證實(shí)中國(guó)人群ApoE 基因多態(tài)性與他汀類藥物療效相關(guān)，E4 等位基因攜帶者相對(duì)E2 和E3 降脂效果較差[3，13]。本研究表明，瑞舒伐他汀對(duì)E3/3 基因型的TG 降低作用最強(qiáng)（P＜0.05），提示瑞舒伐他汀的治療效果與ApoE 基因多態(tài)性存在一定的相關(guān)性；但經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析發(fā)現(xiàn)，各基因型之間的TC、LDL-C 及HDL-C 等指標(biāo)的變化差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。可能由于基因多態(tài)性對(duì)血脂水平的影響機(jī)制較為復(fù)雜，未來(lái)還需要大規(guī)模的研究加以驗(yàn)證。