IH-1000全自動血型儀在篩選Fya陰性血液中的應用

潘英芳，邵靜茹，趙愛平，周娜，徐群，宋永紅

(山東省血液中心血型參比研究室，濟南250014)

當某種血型在人群中僅有小于千分之一的人擁有時，即可認為該血型為稀有血型[1]。當稀有血型患者需要輸血時，一方面很可能由于相同血型在人群中出現的頻率十分罕見，無法及時找到相匹配的血液，另一方面由于稀有血型患者一旦產生相應的稀有血型抗體，輸注血型不合的血液即可產生輸血反應，嚴重者甚至可致死亡。因此，稀有血型患者用血一直是臨床輸血的難題，快速、高效地篩選出相合的稀有血型血液已成為亟待解決的問題。國內實驗室一般采用傳統手工方法篩選稀有血型。最近我們用IH-1000全自動血型儀篩選Fya陰性血液，并完成1例抗Fya陽性患者配血工作。

1 資料與方法

1.1對象 患者，女，47歲，圍絕經期功能失調性子宮出血、貧血，血紅蛋白50 g/L，曾多次輸血，欲手術備血，醫院輸血科檢測不規則抗體呈陽性，送本室進行抗體鑒定，并要求配血4 U。

1.2標本采集與處理 由本中心專業人員采集獻血者血液，EDTA-K2抗凝，4 ℃保存，行常規血型檢測后冷鏈運輸本室待篩選。

1.3主要儀器與試劑 IH-1000全自動血型儀(美國Bio-Rad公司)，KUBOTA-KA2200血清學離心機、KUBOTA-3220毛細管超速離心機(日本久保田公司)，HH-W600金壇數顯三用恒溫箱(金壇市科析儀器公司)，MC450紅細胞洗滌離心機(日本日立公司)，所有儀器均在校準有效期內使用。

單克隆抗A抗體(批號：20190917)、抗B抗體(批號：20190204)、ABO試劑紅細胞(批號：20200113)、抗C抗體(批號：20193001)、抗c抗體(批號：20183102)、抗E抗體(批號：20203201)、抗e抗體(批號：20183302)均為IgM型抗體，均購自上海血液生物醫藥公司，抗D抗體(IgM型，批號：8000254001)、抗Fya抗體(IgG型，批號：8000236190)、抗Fyb抗體(IgG型，批號：8000232692)、篩選細胞(批號：8000261662)、譜細胞(批號：8000261664)均購自荷蘭Sanquin公司，抗人球蛋白卡、樣本稀釋液均購自美國Bio-Rad公司，所有試劑均合格。

1.4免疫血清學實驗 ABO血型及其他特殊血型抗原鑒定、不規則抗體篩查鑒定、交叉配血均按照《全國臨床檢驗操作規程》及試劑盒說明書操作[2]，抗體篩查、鑒定結果均結合所用譜細胞抗原格局表判讀。

1.5稀有血型篩選

1.5.1抗體工作液選擇(參照抗體效價測定) 將抗體試劑原液倍比稀釋，在各倍比稀釋抗體的試管(微孔板、凝膠卡孔)中加入紅細胞溫育(試管法、微板法紅細胞濃度為3%～5%，體積為50 μL；凝膠卡紅細胞濃度為0.8%，體積為50 μL)，洗滌后加入抗人球蛋白試劑(微柱凝膠卡法無需此步驟)，離心觀察結果，以出現反應強度1+且易于觀察判讀的稀釋度作為最終篩選陰性紅細胞的工作液。

1.5.2試管法、96孔微板法、微柱凝膠卡法篩選Fya陰性紅細胞 均采用抗人球蛋白試驗方法并按試劑盒說明書操作。

1.5.3IH-1000篩選Fya陰性獻血者 參考IH-1000主側交叉配血程序，將抗Fya試劑按1∶64稀釋后加至貼有條形碼的試管內，取代患者血清樣本一側；在IH-Com界面中選擇Work List，點擊Quick Request圖標，在test下拉菜單中選擇自主命名的“稀有血型系統篩選”程序，將抗Fya試劑試管和獻血者樣本試管掃碼上機；開始運行，待實驗結束，機器自行判讀結果。

2 結果

2.1患者血型及其他血型系統表型鑒定 該患者血型為O型，Rh血型系統表型為CCDee，Duffy血型系統表型為Fy(a-b+)。

2.2患者不規則抗體篩查鑒定結果 間接抗人球蛋白實驗結果顯示,患者血清與O1～O3篩選細胞均存在不同程度的凝集，強度分別為0+,4+,2+s(s：strong指強凝集)；進一步運用O1～O16譜細胞與患者血清反應存在不同凝集，格局明顯，結合患者Rh系統及Duffy系統表現型，推斷鑒定該患者血清內不規則抗體為抗E、抗c合并抗Fya抗體。

2.3用IH-1000 篩選Fya陰性紅細胞 從1 500名獻血者血液中篩選出4名Fya陰性者，采用手工微柱凝膠法，用抗Fya抗體試劑原液進行確認，經驗證均為Fya陰性；同時確認其Rh系統CcEe表現型,其中2例表型為CCee。

2.4主側交叉配血 用患者血清與2名Fya抗原確認陰性且E、c抗原陰性的獻血者紅細胞進行主側配血試驗，用手工微柱凝膠法主側配血相合。

2.5IH-1000篩選Fya陰性血液方法與傳統方法對比 常規確認Fya抗原采用抗Fya抗體原液，考慮到抗Fya抗體試劑成本高，對于初步篩選Fya陰性血液，首先對抗體稀釋比例進行預實驗，采用抗原為雜合Fy(a+b+)的紅細胞，進行Fya抗體效價驗證，最終以1+強度凝集稀釋度作為工作液條件，即經典試管抗人球蛋白實驗法(簡稱傳統試管法)按照稀釋比例1∶8、96孔微板抗人球蛋白實驗法(簡稱96孔微板法)按照稀釋比例1∶2、微柱凝膠卡法和IH-1000均按照稀釋比例1∶64工作液進行篩選操作,見表1。

表1 4種方法初篩所用抗Fya抗體稀釋比例

用經典試管抗人球蛋白實驗法(簡稱傳統試管法)、96孔板抗人球蛋白實驗法(簡稱96孔微板法)、手工微柱凝膠檢測卡方法及IH-1000 4種方法預實驗對比抗體物料消耗、人力消耗、工作效率、結果判讀難易程度等，最終選擇IH-1000方法篩選上述1 500例獻血者血液，見表2。

表2 4種方法篩選Fya抗原陰性血液對比

3 討論

通常將ABO以外的血型抗體稱之為不規則抗體。近年來，由于ABO、RhD抗原同型輸血已得以規范，不規則抗體誘發的輸血反應上升為影響臨床輸血安全的重要因素。因此，輸血前行不規則抗體篩查是保障臨床輸血安全的重要措施之一[3-4]，而稀有血型系統對應的罕見不規則抗體雖然少見，但其誘發輸血反應不容忽視。Duffy血型系統中Fya抗原陰性血液在亞洲人群中的概率約為3‰，這些罕見個體一旦產生相應不規則抗體，即面臨配血困難，繼而存在延誤治療的風險[5-7]。本病例存在抗c、抗E、抗Fya 3種不規則抗體，為Fya陰性稀有血型患者。本病例重度貧血,急需輸注配血相合血液，考慮到抗Fya抗體可引起速發性或者延遲性溶血性輸血反應[8]，因此，最好選擇Fya陰性血液輸注，3種抗原同時陰性的頻率為0.6‰，需要篩選至少1 500名獻血者，我們面臨篩選Fya陰性稀有血型的困難。

傳統稀有血型篩選方法，主要分為傳統試管法、96孔微板法、微柱凝膠卡法，均需要手工配制紅細胞懸液，工作量大，且消耗大量抗體試劑及其他耗材，同時需對每一個標本試管或者凝膠卡孔準確標記，讀取結果靠肉眼觀察，主觀性強，步驟繁雜，每步都存在誤差可能性[9-10]。近年來，一些實驗室開展基因技術篩選稀有血型，但由于技術要求較高，涉及設備較多，經費較大，基因技術推進相對緩慢[11]。為迅速準確篩選到相配合的血液，我科室利用IH-1000交叉配血程序，將稀有血型篩選全自動化。IH-1000系一款免疫血液學診斷用的全自動系統，是基于免疫學抗原抗體反應的卡式凝膠技術，能夠處理多種免疫血液學ID-Card技術，包括ABO血型分型、抗體篩查、抗體鑒定、抗人球蛋白實驗測試和交叉配血[12-14]。IH-1000在醫院輸血科應用較廣且應用多年，由于臨床標本量大，IH-1000在臨床輸血中應用優勢明顯，但臨床輸血科儲血有限，一旦遇到復雜同種抗體造成配血不合病例，多委托血站篩選血液。我實驗室在接到此類標本后，一般先行不規則抗體鑒定，再行抗原陰性獻血者篩選并配血。借助血站大量獻血者樣本試管儲備優勢，在IH-1000交叉配血功能基礎上建立稀有血型程序，再對篩選的陰性獻血者行紅細胞相應抗原確認，短時間內便從1 500名獻血者中為患者篩選到了c抗原、E抗原及Fya抗原均陰性的血液，與患者主側配血試驗相合，患者因此得到及時安全的輸血治療。

經多次預實驗及實踐，本實驗室建立的IH-1000稀有血型篩選程序，已形成比較成熟的體系程序，利用IH-1000全自動血型儀高效、靈敏一體化優勢，運用較低的抗體濃度、較少的人力耗材成本、較便捷的操作即實現了Fya陰性血液的篩選。后續我們反復實踐，證實該程序也可以用于篩選Diego等其他血型系統的稀有血型血液。IH-1000篩選稀有血型程序可以在臨床輸血中推廣，便于保障臨床供血，同時可以加快我國稀有血型庫建設[15]，豐富稀有血型庫信息資源，緩解稀有血型患者用血難問題。