戊丙酸類藥物氣相色譜-質(zhì)譜檢驗方法分析

河南省駐馬店市食品藥品檢驗所（463000）薛毅博 李啟彬 葉英劍 劉園園

近年來，通過對戊丙酸類藥物研究的逐步深入，創(chuàng)造出了諸多檢驗的方法，最普遍的就是熒光光度法、化學(xué)顯色法、紅外吸收法和氣相色譜等[1]。通過將戊丙酸類藥物和酸性物質(zhì)結(jié)合發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，能夠很快速的形成出新藥物，即丙戊酸，所以對檢材中的戊丙酸進行專業(yè)檢測在操作上相對方便，易操作，因為戊丙酸類藥物沒有氮元素的存在，且本質(zhì)上屬于一種鎮(zhèn)靜止痛藥物，其電負性很低，如果使用色譜-氮磷檢測器和氣相色譜-電子捕獲檢測器進行檢測，由于這兩種檢測方法自身具有的局限性，導(dǎo)致檢測準確率容易出現(xiàn)較大誤差，就容易出現(xiàn)誤檢和漏檢的情況產(chǎn)生[2]。如果使用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀進行檢測，其就能一定程度彌補其他檢測方法的局限性，通過產(chǎn)生更高的靈敏度，降低檢測限，就可以很大程度提高檢測的準確率，降低漏檢和誤檢的概率，這種方法在對諸多不同生物檢材的戊丙酸檢測中都能起到顯著作用。此檢測方法因為構(gòu)成的不同，其分離效率更高，質(zhì)譜靈敏度也要略勝一籌。將其用于戊丙酸類藥物中毒事件的檢測過程中，能夠起到更加有效的作用[3]。

1 儀器和試劑

1.1 試劑和使用物質(zhì) 對照品：戊丙酸、標準用品由專業(yè)機構(gòu)提供。試劑：乙醇、三氯甲烷、無水硫酸鈉、硝酸。

1.2 儀器和設(shè)備 安捷倫7890A-5975C氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀（GC/MS）、ThermoTDZ5高速離心機、振蕩器。

2 操作步驟及實驗過程

2.1 配置溶液 配置出濃度為0.2mg/mL的戊丙酸標準溶液乙醇工作液，進行冷凍儲存，其有效期大概為180d；配置3ug/ml的戊丙酸標準乙醇溶液來進行對比質(zhì)量控制，常溫保存，有限期限為120d；配置5ug/ml、15ug/ml、30ug/ml、50ug/ml、100ug/ml的戊丙酸乙醇標準溶液，當作標準曲線工作液。

2.2 檢材處理 對每種檢查材料進行取用，都為3克，將其分別注入2mol/L的硝酸溶液中，將其酸堿性進行微調(diào)，搖晃3min及以上，然后注入三氯甲烷10ml，使用超聲波進行萃取15min，搖晃15min，再加入干性硫酸鈉5mg，在20000r/min的高速離心機中進行離心15min，反復(fù)提取數(shù)次。

3 檢驗和結(jié)果

3.1 檢驗 分別以0.2mg/ml的戊丙酸標準的檢材進行液體取用，空白添加提取液以及空白液供氣質(zhì)聯(lián)用儀進行檢驗，每次進樣2ul，分別進行3次。

3.2 結(jié)果

3.2.1 線性關(guān)系表現(xiàn) 通過對戊丙酸儲備液的準確進行配制，其濃度為5ug/ml、15ug/ml、30ug/ml、50ug/ml、100ug/ml，分別對其進行評測。將峰面積（y）當作縱坐標，以濃度（x，ug/ml）作為橫坐標進行線性回顧方程設(shè)定，回歸方程為：y=3.633x-3.153；r2=0.89821，通過對結(jié)果進行分析討論可以發(fā)現(xiàn)，戊丙酸在濃度5～600ug/ml的范圍內(nèi)峰面積和濃度呈線性關(guān)系，檢測出的濃度最低值為5ug/ml。

3.2.2 進行回收的概率和精密度實驗 取用空白人血共3ml，將其和一定劑量的戊丙酸進行融合，制備成的戊丙酸濃度為400ug/ml和600ug/ml的成品，再使用相同步驟和方法進行供氣質(zhì)聯(lián)檢驗方法進行處理和檢驗，通過對兩種不同濃度進行分析，戊丙酸的回收概率達到了76.3%和78.4%。

3.2.3 結(jié)果 通過對檢材進行準確的檢查并提取出一定量的液體進行檢驗，發(fā)現(xiàn)檢材提取出的液體都檢查出了和0.2mg/ml戊丙酸提取液體保存時間達到一致的色譜峰，其中檢材提取液保存的時間為3.5～5.4min，戊丙酸標準液體保存的時間為3.2～6.5min，而且質(zhì)譜特征離子碎片和相對豐度都比與戊丙酸標準液一致，空白對照樣品沒有干擾，陽性結(jié)果準確性高。

4 討論及應(yīng)用案例

4.1 關(guān)于色譜柱的選取 戊丙酸的結(jié)構(gòu)較為特殊，其中含有一定量的-COOH這一類極性較大的物質(zhì)，選取弱極性柱或者中性柱進行物質(zhì)分離帶來的檢測準確率和效果也略勝一籌。此次研究對DP-1MS、HP-5MS、HP-INNOWAX（ms）和XO-17MS四種差異比較明顯的色譜柱進行了檢驗，通過對其結(jié)果的觀察分析可以發(fā)現(xiàn)，HP-5MS和HP-INNOWAX（ms）兩種柱子峰形要更好，沒有拖尾狀況的產(chǎn)生，而且進行分離也更加方便快捷，效果更好。

4.2 如何選擇去乳化劑 在對需要用于檢驗的生物檢材的處理過程中，進行液體提取的話，其容易出現(xiàn)一定程度的乳化現(xiàn)場，尤其是進行血液提取的時候，乳化現(xiàn)象更是明顯，所以要想進一步提高回收率，就要先做好消除乳化現(xiàn)象這一步驟。此次研究在對檢材消除乳化的過程中，選取了無水硫酸鈉作為主要去乳劑進行干預(yù)，得到的效果較好，不僅能夠顯著達到消除乳化的效果，還不會造成過度污染。

4.3 具體案例 2018年6月，XX省XX縣公安局接到群眾報案稱，某女子在買菜回家的路上突發(fā)身體不適，在撥打120急救電話后，送醫(yī)搶救無效后死亡。經(jīng)過專業(yè)法醫(yī)進行解剖查驗發(fā)現(xiàn)，這名女子死亡的原因是呼吸系統(tǒng)突發(fā)狀況，出現(xiàn)呼吸衰竭癥狀，可以排除機械性窒息和疾病導(dǎo)致窒息死亡。通過對常規(guī)農(nóng)藥進行檢測和化驗，均呈陰性，在對常見鎮(zhèn)靜止痛劑進行查驗中，發(fā)現(xiàn)其中存在戊丙酸成分。經(jīng)過核實，這名女子沒有癲癇病病史，相關(guān)調(diào)查人員就死者關(guān)系人進行了調(diào)查，最終發(fā)現(xiàn)其中一個與其有感情糾紛且有癲癇疾病病史的嫌疑人，經(jīng)查，嫌疑人為該女子的情夫，其出現(xiàn)感情糾紛后，為了教訓(xùn)死者，在死者的食物中添加了大量戊丙酸鈉，最終導(dǎo)致其死亡。