小鼠視網膜內Spata7基因敲除模型構建及其光感受器細胞凋亡機制的研究

（中國醫科大學附屬第四醫院眼科，沈陽 110005）

視網膜色素變性（retinitis pigmentosa，RP）是一種進行性、不可逆性、遺傳性視網膜疾病［1］。常表現為夜盲、視野缺損和漸進性視力下降。RP一般先累及中周部視網膜，逐漸向后極部進展。這是由于光感受器細胞中的視桿細胞最先發生凋亡，隨著疾病進展，視錐細胞也逐漸死亡［2-3］。目前已發現超過80種基因可導致RP。Spata7基因突變是導致早發型隱性遺傳RP的關鍵基因之一，可致光感受器細胞早期死亡［4-7］。SPATA7蛋白表達于視網膜光感受器細胞中連接纖毛處，其突變導致光感受器細胞的連接纖毛破壞，引發光感受器細胞相關蛋白的內節到外節的轉運障礙［8-9］。視紫紅質蛋白（rhodopsin，RHO）位于光感受器細胞外節處，是維持光感受器細胞功能的重要蛋白。當RHO合成后無法被轉運到光感受器細胞外節時，會停留在光感受器細胞內質網（endoplasmic reticulum，ER），導致ER應激，并發生光感受器細胞死亡［10-13］。部分RP是由于RHO在光感受器細胞ER內的非正常折疊或運輸障礙造成。由此推測Spata7基因突變可能導致RHO在ER內聚集，發生ER應激，導致光感受器細胞死亡。

規律間隔成簇短回文重復序列（clustered regularly interspaced short palindromic repeats，CRISPR）/Cas9技術是近年來用于基因敲除的基因編輯方法，多用于全身目的基因敲除［14-16］。本研究首次運用腺相關病毒（adeno-associated virus，AAV）作為載體，將CRISPR/Cas9系統搭載入視網膜，構建Spata7視網膜內敲除模型，驗證了CRISPR/Cas9技術視網膜內靶向敲除的有效性，并進一步探討了Spata7基因在光感受器細胞中的功能。

1 材料與方法

1.1 實驗動物

C57BL/6基因背景的野生型小鼠在12 h光照和12 h暗適應下飼養。……