雞血藤提取物對(duì)大鼠纖維化肝細(xì)胞中膠原蛋白表達(dá)及TGF-β1/p38MAPK信號(hào)通路的影響

韓云雪 李麗梅 石潔瓊

(桂林醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院中西醫(yī)結(jié)合科，桂林 541000)

肝纖維化是指由各種致病因子所致肝內(nèi)結(jié)締組織異常增生的病理生理過(guò)程，是各種數(shù)慢性肝病發(fā)展為肝硬化不可逾越的階段[1,2]。因此，遏制肝纖維化的發(fā)生對(duì)預(yù)防肝硬化具有至關(guān)重要的意義。雞血藤，又名血風(fēng)藤、馬鹿藤、紫梗藤，是我國(guó)一種傳統(tǒng)中藥，具有補(bǔ)血行血、通經(jīng)活絡(luò)、抗炎、抗氧化、抗病毒、抗腫瘤、免疫調(diào)節(jié)、鎮(zhèn)靜催眠等作用[3-6]。近年來(lái)，有研究指出，黃芪雞血藤湯具有預(yù)防大鼠肝纖維化的功效，其機(jī)制可能與TGF-β1信號(hào)通路有關(guān)[7]。為研究雞血藤抗肝纖維化的機(jī)制，參照文獻(xiàn)[8]構(gòu)建肝纖維化動(dòng)物模型，初步探討TGF-β1/p38MAPK信號(hào)通路在雞血藤提取物預(yù)防肝纖維化中的作用，為雞血藤提取物在肝纖維化疾病中的應(yīng)用提供了理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1材料 8只Wistar雄性大鼠(體質(zhì)量200～250 g)購(gòu)于上海凱學(xué)生物科技有限公司；M199培養(yǎng)基和胎牛血清購(gòu)于美國(guó)Gibco公司；二甲基亞硝胺(DMN)和Ⅳ型膠原酶購(gòu)于美國(guó)Sigma公司；雞血藤購(gòu)于廣東南領(lǐng)藥業(yè)有限公司；無(wú)效對(duì)照劑Placebo和TGF-β1信號(hào)通路激活劑SRI-011381購(gòu)于美國(guó)GLPBIO公司；鼠源Ⅰ型膠原蛋白(Col Ⅰ)抗體、兔源p38MAPK抗體、兔源CyclinD1抗體、兔源P21抗體、兔源GAPDH抗體、HRP標(biāo)記的羊抗鼠以及羊抗兔Ⅱ抗購(gòu)于美國(guó)Abcam公司；鼠源TGF-β1抗體購(gòu)于美國(guó)Santa Cruz公司。MTT試劑盒購(gòu)于北京索萊寶生物科技有限公司；RIPA裂解液、BCA蛋白定量試劑盒、Western封閉液、洗滌液、聚偏二氟乙烯(polyvinylidene fluoride，PVDF)膜購(gòu)于上海碧云天生物技術(shù)有限公司。

1.2方法

1.2.1雞血藤提取物的制備 雞血藤提取物制備參照文獻(xiàn)[9]進(jìn)行。……