STEAP1對乳腺癌細胞增殖、侵襲遷移及Wnt/β-catenin信號通路的影響

李卿明 張勝亮 徐庭華 宋金珂

(貴州省中醫藥大學第一附屬醫院外科，貴陽 550001)

乳腺癌的發生受多種因素影響，其中原癌基因激活和抑癌基因失活在乳腺癌發生發展中具有重要作用[1]。前列腺跨膜上皮抗原(prostate transmembrane epithelial antigen 1,STEAP1)最早被發現于前列腺癌，為前列腺特異性細胞表面抗原家族成員，在多種惡性腫瘤中高表達，發揮癌基因作用[2，3]。STEAP1在乳腺癌組織中低表達，可能發揮抑癌基因作用，但作用機制尚未明確[4]。Wnt/β-catenin信號通路在乳腺癌細胞的增殖、侵襲和遷移中發揮重要作用。本文研究過表達或沉默STEAP1對乳腺癌細胞增殖、侵襲遷移及Wnt/β-catenin信號通路的影響，探討STEAP1對乳腺癌的可能作用機制。

1 材料與方法

1.1材料 人乳腺癌BT549細胞(中國科學院上海細胞庫)，載有STEAP1 cDNA轉染的慢病毒、載有STEAP1特異性RNA干擾的慢病毒及相應陰性對照病毒(上海吉凱公司)，兔抗人STEAP1單克隆抗體、兔抗人PCNA單克隆抗體、兔抗人Vimentin單克隆抗體、兔抗人MMP9單克隆抗體、兔抗人Wnt單克隆抗體、兔抗人β-catenin單克隆抗體、兔抗人E-cadherin單克隆抗體(美國Santa Cruz公司)，TRIzol試劑、ECL化學發光試劑盒、反轉錄試劑盒、RT-PCR試劑盒(美國BPB公司)，CCK8試劑、DMEM培養基、胰蛋白酶(美國Sigma公司)。

1.2方法

1.2.1細胞培養 BT549細胞置于DMEM培養基(含10%胎牛血清和青霉素、鏈霉素)培養，細胞生長至90%以上融合度時，胰酶消化并收集細胞，傳代培養，取對數生長期、生長狀態良好的細胞用于后續實驗。

1.2.2細胞轉染與分組 將轉染STEAP1 cDNA慢病毒的BT549細胞作為STEAP1過表達組(LV-STEAP1)，轉染STEAP1 RNA干擾慢病毒作為沉默STEAP1組(siR-STEAP1)，并設空白對照組(BC)及陰性對照組(NC)。將生長良好……