副溶血弧菌TDH快速免疫膠體金檢測板的研制①

楊靖亞 方 艷 陸曉帆 張 建 趙 勇

(上海海洋大學食品學院，農(nóng)業(yè)部水產(chǎn)品貯藏保鮮質(zhì)量安全風險評估實驗室，上海 201306)

副溶血弧菌是革蘭氏陰性嗜鹽菌，存在于沿海棲息地和河口,是導致日本海產(chǎn)品相關胃腸炎的主要原因[1,2]。副溶血弧菌是人類病原體，可引起胃腸炎、傷口感染和敗血癥[3]。毒性副溶血弧菌菌株通常產(chǎn)生熱穩(wěn)定的直接溶血素(thermostable direct hemolysin，TDH)和/或TDH相關溶血素(TRH)，被認為是物種致病性分子標記[4-7]。TDH可引起Wagatsuma瓊脂培養(yǎng)基中稱為神奈川現(xiàn)象(Kanagawa phenomenon，KP)的β型溶血，大部分臨床分離株均為KP陽性[8，9]。

現(xiàn)已開發(fā)了副溶血弧菌的多重PCR檢測方法，同時使用物種特異性基因和毒素基因用于毒性特異性檢測和非毒性副溶血菌株檢測，但靈敏度和特異性不高，經(jīng)常出現(xiàn)假陽性和假陰性結(jié)果[10-14]。因此相繼開發(fā)了針對TDH的新型檢測方法，如質(zhì)譜-脈沖電泳-PCR連用技術、斑點ELISA方法、CPA-核酸試紙條法，但具有耗時、成本昂貴等缺陷[15-17]。目前急需一種便捷、經(jīng)濟、快速的檢測方法以滿足市場需求。向輝等[18]研發(fā)了新型納米標記免疫層析技術，但待測樣本的前處理較為繁瑣。

膠體金試紙條檢測法是一項發(fā)展迅速的新型檢測手段，使用便捷、檢測速度、靈敏度高、特異性強，但目前國內(nèi)對于將膠體金技術用于副溶血弧菌TDH的快速檢測鮮有報道[19]。本研究旨在研制針對副溶血弧菌TDH快速檢測的快速免疫膠體金檢測板，以滿足大批量樣品快速高效檢測的需要。

1 材料與方法

1.1材料 副溶血弧菌(ATCC33846)、沙門氏菌、大腸桿……