過表達硫氧還蛋白-1抑制戊四氮致癲癇大鼠海馬神經(jīng)元細胞凋亡①

甘 露 周弟彌 張 磊 陳 琳

(南華大學附屬第二醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科，衡陽 421001)

癲癇是全球常見的慢性神經(jīng)系統(tǒng)疾病，發(fā)病機制復雜，目前尚未明確。任何引起大腦生理結(jié)構(gòu)或功能紊亂的因素均可能導致癲癇，威脅各年齡階段人群[1,2]。研究報道，全球約有7 000萬癲癇患者，我國癲癇患者約占全球的13%[3]。目前，癲癇的主要治療方式是抗癲癇藥物治療，但仍有25%～30%的患者發(fā)展為耐藥性癲癇，治療效果并不理想[4]。尋找治療癲癇的新方法成為急需解決的問題。硫氧還蛋白(thioredoxin，Trx)是一種廣泛存在于生物體內(nèi)的抗氧化分子，可通過抗氧化效應(yīng)減輕神經(jīng)元氧化應(yīng)激損傷，具有顯著的神經(jīng)保護作用[5]。Trx與Trx還原酶(TrxR)及還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(nicotinamide adenine dinucleotide phosphate oxidase，NADPH)組成硫氧還蛋白系統(tǒng)，發(fā)揮抗氧化功能，并參與調(diào)控戊四氮(pentylenetet-razol，PTZ)點燃致癲癇小鼠模型氧化應(yīng)激過程[6,7]。Trx-1是Trx蛋白家族中的主要成員，參與氧化還原反應(yīng)，并通過凋亡信號通路調(diào)控細胞凋亡[8]。本研究擬通過PTZ誘導大鼠癲癇模型，并采用Trx-1過表達慢病毒進行干預，探討其對大鼠海馬組織神經(jīng)元損傷及細胞凋亡的影響，以期為癲癇的臨床治療提供新思路。

1 材料與方法

1.1材料

1.1.1實驗動物 40只健康清潔級SD大鼠(長沙市天勤生物技術(shù)有限公司)，動物合格證號：SCXK(湘)2014-0010，體質(zhì)量230～250 g，7～8周齡。

1.1.2試劑 載體(上海吉凱基因化學技術(shù)有限公司)；引物(南京金斯瑞生物科技有限公司)；TRIzol、反轉(zhuǎn)錄試劑盒(大連TaKaRa公司)；SYBR Green PCR試劑盒(美國KAPA Biosystems公司)；BCA蛋白濃度測定試劑盒(北京康為世紀公司)；兔抗Trx-1多克隆抗體(美國CST公司，貨號：#2298)；……