不同條件下牙鲆血清免疫學(xué)指標(biāo)的比較

宋立民　李明澤　李仰真　馬林　吳會(huì)民　劉義　李楠

摘要 為評(píng)價(jià)遺傳背景、體重、黑化、運(yùn)輸應(yīng)激等對(duì)牙鲆（Paralichthys olivaceus）血清免疫學(xué)指標(biāo)的影響，以引進(jìn)的“鲆優(yōu)2號(hào)”抗病牙鲆和普通牙鲆為試驗(yàn)材料，通過(guò)肉眼區(qū)分無(wú)眼側(cè)有無(wú)黑化，在不同生長(zhǎng)階段采集樣本，采樣前有無(wú)施行包裝運(yùn)輸?shù)仁侄危瑢⒀芯繉?duì)象分為7個(gè)試驗(yàn)組，分別測(cè)定溶菌酶（LYS）活力、酸性磷酸酶（ACP）活力、超氧化物歧化酶（SOD）活力、免疫球蛋白M（IgM）含量、補(bǔ)體3（C3）和補(bǔ)體4（C4）含量等6種免疫學(xué)指標(biāo)。結(jié)果表明：試驗(yàn)組1各項(xiàng)檢測(cè)指標(biāo)均低于試驗(yàn)組2，但差異均不顯著（P>0.05）;試驗(yàn)組4各項(xiàng)檢測(cè)指標(biāo)均低于試驗(yàn)組7，其中LYS、ACP、SOD活力及IgM含量差異極顯著（P<0.01），C4含量差異顯著（P<0.05），C3含量差異不顯著（P>0.05）;試驗(yàn)組1各檢測(cè)指標(biāo)均低于試驗(yàn)組7，且差異超級(jí)顯著（P<0.001）;試驗(yàn)組2各檢測(cè)指標(biāo)均小于試驗(yàn)組4，SOD活力及IgM、C3含量差異超級(jí)顯著（P<0.001），LYS活力差異極顯著（P<0.01），C4含量差異顯著（P<0.05），ACP活力無(wú)顯著差異;試驗(yàn)組3與試驗(yàn)組4各指標(biāo)差異均不顯著（P>0.05）;比較試驗(yàn)組5、試驗(yàn)組6與試驗(yàn)組7的檢測(cè)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，只有試驗(yàn)組5中C3含量極顯著低于試驗(yàn)組6（P<0.01），其余指標(biāo)差異均不顯著。通過(guò)一定的育種手段可使養(yǎng)殖對(duì)象在某一個(gè)或多個(gè)方面獲得可遺傳的免疫優(yōu)勢(shì);隨著牙鲆個(gè)體的生長(zhǎng)，體重增加，抗病力逐漸增強(qiáng);牙鲆的抗病能力與黑化與否的相關(guān)性未達(dá)到顯著水平;對(duì)于同一遺傳背景，經(jīng)歷運(yùn)輸（未產(chǎn)生休克）與未經(jīng)歷運(yùn)輸樣本魚的6種免疫學(xué)指標(biāo)差異不顯著。

關(guān)鍵詞 牙鲆;遺傳背景;體重;黑化;運(yùn)輸應(yīng)激;免疫學(xué)指標(biāo)

中圖分類號(hào) S917.4文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A文章編號(hào) 0517-6611（2020）22-0094-05

doi：10.3969/j.issn.0517-6611.2020.22.025

Comparison of Serum Immune Indices of Paralichthys olivaceus under Different Conditions

SONG Li-min1， LI Ming-ze1， LI Yang-zhen2 et al

（1. Tianjin Fishery Research Institute， Tianjin 300221;2. Yellow Sea Fisheries Research Institute， Chinese Academy of Fishery Sciences （CAFS）， Qingdao，Shandong? 266071）

Abstract In order to evaluate the influence of genetic background， body weight， hypermelanosis and transportation stress on the serum immune indices of Paralichthys olivaceus， the subjects were divided into 7 experimental groups， according to blind-side with hypermelanosis or not， different growth stages， and sampling with transportation stress or not， from the resistant flounder and common flounder which were used as experimental materials. Lysozyme （LYS） activity， acid phosphatase （ACP） activity， superoxide dismutase （SOD） activity， immunoglobulin M （IgM） content， complement C3 content， C4 content were measured and compared separately of the above groups. The results indicated that the test items of experimental group 1 were less than those of group 2， but the difference was not significant （P>0.05）.The test items of experimental group 4 were lower than those of group 7， and there were highly significant differences （P<0.01） in LYS activity， ACP activity， SOD activity and IgM content， while the difference in C4 content was significant （P<0.05）， there was no significant difference （P>0.05） in C3 content.The test items of experimental group 1 were lower than those of group 7， and the difference were super significant （P<0.001）.The test items of experimental group 2 were lower than those of group 4， and there were super significant differences （P<0.001） in SOD activity， IgM content and C3 content， while highly significant difference （P<0.01） in LYS activity， significant difference （P<0.05） in C4 content， no significant difference （P>0.05） in ACP activity.There were no significant difference （P>0.05） in 6 immune indices between experimental group 3 and group 4.Only C3 content of group 5 was highly significant （P<0.01） lower than that of group 6， by comparing the test items of experimental group 5， group 6 and group 7. The results showed that heritable immune advantage in one or more aspects could be obtained by cultured animals， according to certain breeding methods.The disease resistance was gradually increased with the growth of Paralichthys olivaceus individuals.There was no significant correlation between immune indices and blind-side with hypermelanosis or not of Paralichthys olivaceus.The same result as above was obtained about sampling with transportation stress （which was not an approaching death shock） or not in this experiment.

Key words Paralichthys olivaceus;Genetic background;Body weight;Hypermelanosis;Transportation stress;Immune indices

基金項(xiàng)目 天津市農(nóng)業(yè)發(fā)展服務(wù)中心青年科技創(chuàng)新項(xiàng)目（ZXKJ201908，ZXKJ201911）。

作者簡(jiǎn)介 宋立民（1982—），男，河北秦皇島人，工程師，碩士，從事水產(chǎn)養(yǎng)殖與育種研究。*通信作者，工程師，碩士，從事水產(chǎn)養(yǎng)殖研究。

收稿日期 2020-05-31

牙鲆（Paralichthys olivaceus）屬于鰈形目鰈亞目牙鲆科牙鲆屬，以黃渤海區(qū)分布較多，其主要捕食底棲非經(jīng)濟(jì)魚類及甲殼類，肉質(zhì)細(xì)嫩鮮美[1]，是我國(guó)重要的海水養(yǎng)殖品種之一。鑒于牙鲆養(yǎng)殖過(guò)程中，周年可發(fā)生腹水病害，研究表明其主要致病菌之一是遲緩愛(ài)德華氏菌（Edwardsiella tarda）[2-4]，陳松林團(tuán)隊(duì)通過(guò)多年努力培育出抗遲緩愛(ài)德華氏菌病能力強(qiáng)、生長(zhǎng)較快的牙鲆新品種——“鲆優(yōu)2號(hào)”，為減少養(yǎng)殖牙鲆病害發(fā)生、發(fā)展無(wú)抗養(yǎng)殖提供了新思路[5]。筆者所在課題組于2018年引進(jìn)“鲆優(yōu)2號(hào)”牙鲆抗病苗種，試養(yǎng)期間采集了新品種牙鲆和普通牙鲆的血清樣本，用于測(cè)定其溶菌酶活力（LYS）、酸性磷酸酶活力（ACP）、超氧化物歧化酶活力（SOD）、免疫球蛋白M含量（IgM）、補(bǔ)體3（C3）和補(bǔ)體4（C4）含量等重要免疫學(xué)指標(biāo)，依據(jù)牙鲆不同遺傳背景、不同體重、無(wú)眼側(cè)有無(wú)黑化、采樣前有無(wú)運(yùn)輸應(yīng)激等分成不同試驗(yàn)組，并對(duì)測(cè)定的免疫學(xué)指標(biāo)進(jìn)行比較，以期為“鲆優(yōu)2號(hào)”牙鲆新品種的抗病原理研究提供免疫學(xué)依據(jù)，同時(shí)為進(jìn)一步研究牙鲆免疫學(xué)指標(biāo)的影響因素積累數(shù)據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)魚來(lái)源及飼養(yǎng)條件

“鲆優(yōu)2號(hào)”牙鲆新品種購(gòu)于海陽(yáng)市黃海水產(chǎn)有限公司，普通牙鲆購(gòu)于秦皇島啟民水產(chǎn)養(yǎng)殖有限公司，二者飼養(yǎng)條件相同。試驗(yàn)地位于天津市民峰水產(chǎn)有限公司，使用飼料為萊州鴻頤水產(chǎn)有限公司生產(chǎn)的“海童”牌鲆鰈類配合飼料，水泥池面積40 m2，苗種規(guī)格為200 g左右時(shí)放養(yǎng)密度為32尾/m2，苗種規(guī)格為600 g左右時(shí)放養(yǎng)密度為17尾/m2，養(yǎng)殖方式為流水養(yǎng)殖，水溫18.0～21.5 ℃，溶解氧含量6.14～8.02 mg/L，pH 8.0～8.2，鹽度26‰。

1.2 試驗(yàn)分組與樣本采集

依據(jù)遺傳背景，分為普通牙鲆和選育的“鲆優(yōu)2號(hào)”牙鲆新品種兩大群體;依據(jù)體重規(guī)格，可分為200和600 g兩個(gè)生長(zhǎng)階段。依據(jù)無(wú)眼側(cè)有無(wú)黑化（圖1），從普通牙鲆苗群體中分別采集黑化樣本和正常樣本;另外依據(jù)采樣前有無(wú)進(jìn)行運(yùn)輸應(yīng)急，從牙鲆新品種群體中采集應(yīng)激樣本和未應(yīng)激樣本，具體情況如表1所示。

采樣前進(jìn)行打包運(yùn)輸操作，參照米紅波等[6]的方法并根據(jù)實(shí)際條件進(jìn)行調(diào)整。運(yùn)輸包裝采用透明PE平口袋（長(zhǎng)90 cm、寬60 cm），運(yùn)輸用水采用曝氣井水，pH 8.3，水溫21.5 ℃，鹽度26‰，溶解氧含量8.02 mg/L。包裝袋內(nèi)注入1/3的水，每袋放入2尾牙鲆，充氣，封口。歷時(shí)80 min運(yùn)至實(shí)驗(yàn)室。表1中試驗(yàn)組5樣本規(guī)格較大，分4次打包，歷時(shí)110 min運(yùn)至實(shí)驗(yàn)室，其中6尾無(wú)呼吸動(dòng)作、產(chǎn)生休克，另2尾呼吸動(dòng)作虛弱，將休克魚送至實(shí)驗(yàn)室，立即采集血樣;試驗(yàn)組6樣本沒(méi)有經(jīng)歷運(yùn)輸應(yīng)急，試驗(yàn)魚從養(yǎng)殖車間現(xiàn)場(chǎng)撈取，直接進(jìn)行血液采集。

1.3 血清樣本的制備和部分免疫學(xué)指標(biāo)的測(cè)定

血清樣本采集參考姜宏波[7]方法，并做適當(dāng)改動(dòng)。具體方法如下：試驗(yàn)魚禁食24 h后，使用200～400 μL/L乙二醇苯醚麻醉，用2 mL注射器于尾部靜脈迅速抽取1.0～1.5 mL血液，緩慢注入2 mL無(wú)菌離心管中，于4 ℃冰箱中靜置2 h，以3 000 r/min 轉(zhuǎn)速離心15 min，分離獲得上清液（即血清）;用0.2 mL無(wú)菌離心管分裝密封，-80 ℃下冷凍待測(cè)。保存過(guò)程中若出現(xiàn)沉淀，則必須再次離心，重新收集上清液。試驗(yàn)所需試劑盒購(gòu)于上海紀(jì)寧實(shí)業(yè)有限公司，使用Rayto RT-6100酶標(biāo)分析儀進(jìn)行部分免疫學(xué)指標(biāo)檢測(cè)。檢測(cè)指標(biāo)包括溶菌酶（LYS）活力、酸性磷酸酶（ACP）活力、超氧化物歧化酶（SOD）活力、免疫球蛋白M（IgM）含量、補(bǔ)體蛋白3（C3）含量、補(bǔ)體蛋白4（C4）含量。

1.4 數(shù)據(jù)處理

試驗(yàn)數(shù)據(jù)均以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差（Mean ± SD）表示。使用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，P<0.05表示差異顯著，P<0.01表示差異極顯著，P<0.001表示差異超級(jí)顯著，使用Excel 2010軟件繪制相關(guān)圖表。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同遺傳背景對(duì)牙鲆血清免疫學(xué)指標(biāo)的影響

從圖2可以看出，試驗(yàn)組1各項(xiàng)檢測(cè)指標(biāo)均低于試驗(yàn)組2，但差異均不顯著（P>0.05）。試驗(yàn)組4各項(xiàng)檢測(cè)指標(biāo)均低于試驗(yàn)組7，其中LYS活力、ACP活力、SOD活力、IgM含量差異極顯著（P<0.01）;C4含量差異顯著（P<0.05）;C3含量差異不顯著（P>0.05）。試驗(yàn)組1、試驗(yàn)組4是從秦皇島啟民水產(chǎn)養(yǎng)殖有限公司購(gòu)得的普通牙鲆，試驗(yàn)組2、試驗(yàn)組7是從海陽(yáng)市黃海水產(chǎn)有限公司購(gòu)得的選育新品種“鲆優(yōu)2號(hào)”，試驗(yàn)組1、4與試驗(yàn)組2、7遺傳背景不同，檢測(cè)結(jié)果表明經(jīng)過(guò)選育的“鲆優(yōu)2號(hào)”牙鲆上述血清免疫學(xué)指標(biāo)比普通牙鲆更有優(yōu)勢(shì)，并隨著個(gè)體的生長(zhǎng)發(fā)育，新品種免疫學(xué)優(yōu)勢(shì)呈增強(qiáng)趨勢(shì)。

2.2 不同體重對(duì)牙鲆血清免疫學(xué)指標(biāo)的影響

從圖3可以看出，試驗(yàn)組1各項(xiàng)檢測(cè)指標(biāo)均低于試驗(yàn)組7，且差異超級(jí)顯著（P<0.001）;試驗(yàn)組2各項(xiàng)檢測(cè)指標(biāo)均低于試驗(yàn)組4，SOD活力、IgM含量、C3含量差異超級(jí)顯著（P<0.001），LYS活力差異極顯著（P<0.01），C4含量差異顯著（P<0.05），ACP活力無(wú)顯著差異（P>0.05）。試驗(yàn)組1牙鲆平均體重（213.30±9.17）g，試驗(yàn)組2平均體重（200.12±13.17）g，二者差異不顯著（P>0.05）;試驗(yàn)組4牙鲆平均體重為（586.39±2695）g，試驗(yàn)組7平均體重為（588.68±9.33）g，二者差異不顯著（P>0.05）;試驗(yàn)組1、7與試驗(yàn)組2、4牙鲆的生長(zhǎng)階段不同，依照試驗(yàn)總體結(jié)果，隨著牙鲆個(gè)體的生長(zhǎng)，其血清免疫學(xué)指標(biāo)產(chǎn)生變化，抗病力逐漸增強(qiáng)，這種趨勢(shì)在“鲆優(yōu)2號(hào)”牙鲆群體中表現(xiàn)尤為明顯。

2.3 無(wú)眼側(cè)黑化與正常牙鲆血清免疫學(xué)指標(biāo)比較

從圖4可以看出，試驗(yàn)組3、4試驗(yàn)魚均為購(gòu)自秦皇島啟民水產(chǎn)養(yǎng)殖有限公司的普通牙鲆，試養(yǎng)環(huán)境相同，無(wú)眼側(cè)體色不同，各檢測(cè)指標(biāo)差異均不顯著（P>0.05），說(shuō)明牙鲆無(wú)眼側(cè)黑化與否與所測(cè)指標(biāo)在血清中的水平無(wú)顯著相關(guān)。

2.4 不同運(yùn)輸應(yīng)激對(duì)牙鲆免疫學(xué)指標(biāo)的影響

從圖5可以看出，試驗(yàn)組5、6與試驗(yàn)組7牙鲆體重差異不顯著，采樣前樣本魚經(jīng)歷操作方式不同，各檢測(cè)指標(biāo)中，只有試驗(yàn)組5中C3含量極顯著低于試驗(yàn)組6（P<0.01），其余值差異均不顯著。樣本魚在短暫運(yùn)輸過(guò)程中沒(méi)有對(duì)檢測(cè)指標(biāo)產(chǎn)生明顯影響，但如果樣本魚受到一定程度的應(yīng)激（比如發(fā)生休克），則會(huì)對(duì)某些指標(biāo)產(chǎn)生顯著影響，其中C3含量在6種檢測(cè)指標(biāo)中表現(xiàn)更為敏感。

3 討論

3.1 選擇6種指標(biāo)初步評(píng)價(jià)免疫力的原因

LYS在抵抗外來(lái)病原入侵中起著重要的作用[8]。LYS能破壞細(xì)胞壁中的肽聚糖，使細(xì)菌細(xì)胞崩解[9];此外，它還能激活補(bǔ)體旁路和吞噬細(xì)胞活性，參與機(jī)體非特異性免疫防御[10]。LYS 是非常重要的免疫因子，其活性高低反映水生生物非特異性免疫水平的高低，因此有很多研究都采用LYS作為重要的免疫學(xué)指標(biāo)[11-13]。ACP廣泛分布于生物界[13]，是巨噬細(xì)胞溶酶體的標(biāo)志酶之一，參與動(dòng)物機(jī)體的免疫活動(dòng)[14-15]。SOD廣泛分布于機(jī)體血液和各組織器官中，是生物體中最先對(duì)活性氧自由基作出反應(yīng)的抗氧化酶[16]。免疫球蛋白是魚類特異性體液免疫應(yīng)答的主要介質(zhì)[17]。目前魚類是最早產(chǎn)生免疫球蛋白的脊椎動(dòng)物，可能僅有免疫球蛋白IgM[14]。IgM含量通常被認(rèn)為是評(píng)價(jià)魚體免疫應(yīng)答反應(yīng)的重要指標(biāo)[9]。魚類的補(bǔ)體系統(tǒng)通過(guò)吞噬細(xì)胞協(xié)助作用來(lái)溶解外來(lái)細(xì)胞和外來(lái)生物體[18]，同時(shí)參與特異性和非特異性免疫[19]，其中C3和C4在補(bǔ)體系統(tǒng)中擔(dān)當(dāng)著重要角色[20]。因此，該試驗(yàn)選擇上述6種指標(biāo)來(lái)評(píng)估牙鲆免疫水平。

3.2 不同遺傳背景對(duì)牙鲆免疫力的影響

姜宏波等[21]認(rèn)為血液中的一些指標(biāo)是反映機(jī)體健康狀況及抗病力的重要參數(shù)，對(duì)克隆牙鲆與普通牙鲆血液生理生化指標(biāo)的研究表明遺傳因素是影響這些指標(biāo)的重要方面。田岳強(qiáng)等[22]對(duì)大菱鲆（Scophthalmus maximus）選育家系與普通家系LYS、IgM等7種非特異免疫因子在肝臟、脾臟與頭腎中的表達(dá)量研究表明攻毒前后6 個(gè)選育家系免疫因子的表達(dá)量均高于普通組。劉堃等[23]研究表明抗病草魚（Ctenopharyngodon idellus）血液中免疫球蛋白IgM轉(zhuǎn)錄本豐度、LYS含量等部分免疫學(xué)生化指標(biāo)顯著高于普通草魚（P<0.05）。楊啟蓮等[24]研究表明選育的“閩優(yōu)1 號(hào)”大黃魚（Larimichthys crocea）血清LYS活力和血細(xì)胞SOD活力均顯著高于對(duì)照組（P<0.05），而血清中的免疫球蛋白含量低于普通養(yǎng)殖群體。該試驗(yàn)在生理水平上同樣證明經(jīng)過(guò)相同階段試養(yǎng)，人工選育的“鲆優(yōu)2號(hào)”牙鲆新品種比普通牙鲆更具免疫優(yōu)勢(shì)，只是不同生長(zhǎng)階段優(yōu)勢(shì)差異程度不同，而且各評(píng)價(jià)指標(biāo)隨著生長(zhǎng)發(fā)育的提升程度亦不同，如試驗(yàn)中補(bǔ)體C3含量的變化程度相對(duì)其他5種指標(biāo)較小，可能是由于其自身生理機(jī)制的特點(diǎn)以及定向選育操作的影響。綜上所述，通過(guò)選擇育種等手段可以使養(yǎng)殖對(duì)象在某一個(gè)或多個(gè)方面獲得可遺傳的免疫優(yōu)勢(shì)，但不同指標(biāo)在不同種類、機(jī)體不同部位中的表達(dá)結(jié)果存在差異，這需要對(duì)免疫應(yīng)答機(jī)理進(jìn)行更深入研究。

3.3 不同體重對(duì)牙鲆免疫力的影響

李澤宇[25]在建立牙鲆抗遲緩愛(ài)德華氏菌病家系的研究中發(fā)現(xiàn)牙鲆魚的全長(zhǎng)、體重等生長(zhǎng)性狀與抗病力呈極顯著正相關(guān)。對(duì)哺乳動(dòng)物豬的研究發(fā)現(xiàn)，仔豬體重越大，免疫力和抗病力越強(qiáng)[26]，且相同生長(zhǎng)期大個(gè)體的抗病力要強(qiáng)于小個(gè)體。該試驗(yàn)養(yǎng)殖過(guò)程中，隨著牙鲆個(gè)體的生長(zhǎng)，體重增加，抗病力逐漸增強(qiáng)，與前述研究結(jié)果類似，然而也存在與該試驗(yàn)不同的研究結(jié)果。侯吉倫等[27]在牙鲆抗淋巴囊腫病家系的選育過(guò)程中發(fā)現(xiàn)牙鲆淋巴囊腫抗病和患病個(gè)體間的體重和體長(zhǎng)差異均不顯著，這可能與抗病性能評(píng)判標(biāo)準(zhǔn)不同有關(guān)。該試驗(yàn)是以血清中幾種免疫相關(guān)酶為評(píng)價(jià)指標(biāo)，間接評(píng)估試驗(yàn)組魚的抗病力，而李澤宇[25]是以試驗(yàn)牙鲆人工感染遲緩愛(ài)德華氏菌后的成活率，侯吉倫等[27]是以在患病環(huán)境中飼養(yǎng)、出現(xiàn)淋巴囊腫癥狀為標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行評(píng)價(jià)，同時(shí)不同致病菌造成機(jī)體免疫應(yīng)答機(jī)制產(chǎn)生差異也是可能原因之一。穆秀瓊[28]在對(duì)吉富羅非魚的養(yǎng)殖試驗(yàn)表明，7周后各家系的總超氧化物歧化酶活力、LYS活力分別與體重增長(zhǎng)呈顯著正相關(guān)，即體重增長(zhǎng)較快的家系其總超氧化物歧化酶水平也較高;試驗(yàn)14周和21周后卻表現(xiàn)為體重的增長(zhǎng)分別與SOD活力、LYS活力的變化沒(méi)有顯著相關(guān)性[28]。這可能與選取的試驗(yàn)對(duì)象種類、生長(zhǎng)階段和養(yǎng)殖方式不同有關(guān)。依照該試驗(yàn)結(jié)果，“鲆優(yōu)2號(hào)”牙鲆群體中體重增加對(duì)血清免疫學(xué)指標(biāo)產(chǎn)生的影響比普通群體更為明顯，這可能與“鲆優(yōu)2號(hào)”牙鲆經(jīng)過(guò)選育個(gè)體差異較小，所獲得抗病力隨著體重的增長(zhǎng)而逐漸增強(qiáng)有關(guān)。

3.4 無(wú)眼側(cè)有無(wú)黑化對(duì)牙鲆免疫力的影響

“黑化”指的是無(wú)眼側(cè)出現(xiàn)黑斑，即黑色素細(xì)胞增加。養(yǎng)殖環(huán)境、密度、營(yíng)養(yǎng)等都能夠?qū)ρ丽业捏w色產(chǎn)生影響[29-30]，亦能夠直接或間接影響魚類免疫力[31-33]。相關(guān)研究表明，金黃殼色馬氏珠母貝（Pinctada fuctada martensii）群體與養(yǎng)殖群體血清免疫酶活力存在差異[34]，3種顏色刺參（Apostichopus japonicus Selenka）在不同光照強(qiáng)度下的免疫酶活性存在差異[35]，另外鑒于該試驗(yàn)引進(jìn)的“鲆優(yōu)2號(hào)”幼苗無(wú)眼側(cè)黑化情況較為普遍，對(duì)照普通苗中存在一定比例的黑化和正常苗;對(duì)不同體色牙鲆之間的免疫學(xué)指標(biāo)進(jìn)行了比較，結(jié)果表明牙鲆的抗病力與無(wú)眼側(cè)黑化與否的關(guān)聯(lián)性不顯著。

3.5 運(yùn)輸應(yīng)激對(duì)牙鲆免疫力的影響

在活魚運(yùn)輸過(guò)程中水體污染、振動(dòng)、密度過(guò)高、溫度變化、運(yùn)輸時(shí)間過(guò)長(zhǎng)等因素均會(huì)不同程度引發(fā)魚體應(yīng)激，進(jìn)而影響機(jī)體功能[36]。宋凱等[37]對(duì)牙鲆的研究表明運(yùn)輸將打破魚體的內(nèi)分泌平衡，使其機(jī)體內(nèi)產(chǎn)生氧化應(yīng)激。該試驗(yàn)結(jié)果表明，相同背景、經(jīng)歷運(yùn)輸（未產(chǎn)生休克）與未經(jīng)歷運(yùn)輸樣本魚的6種免疫學(xué)指標(biāo)差異不顯著，究其原因可能是由于機(jī)體受到應(yīng)激脅迫后，首先進(jìn)行一級(jí)、二級(jí)反應(yīng)，嚴(yán)重時(shí)才導(dǎo)致三級(jí)反應(yīng)，即免疫系統(tǒng)受到抑制等[38-39]，上述6種免疫學(xué)指標(biāo)在機(jī)體內(nèi)參與應(yīng)激反應(yīng)的時(shí)間相對(duì)滯后。

4 結(jié)論

綜上所述，通過(guò)一定的育種手段可使新品種牙鲆獲得一定的免疫優(yōu)勢(shì);隨著牙鲆個(gè)體的生長(zhǎng)，體重增加，抗病力顯著增強(qiáng);牙鲆的抗病性能與黑化與否的關(guān)聯(lián)性不顯著;經(jīng)過(guò)運(yùn)輸（未產(chǎn)生休克）與未經(jīng)過(guò)運(yùn)輸樣本魚的6種免疫學(xué)指標(biāo)差異不顯著。該試驗(yàn)結(jié)果表明定向育種操作、體重、休克均可對(duì)牙鲆某種或某幾種免疫學(xué)指標(biāo)產(chǎn)生影響，無(wú)眼側(cè)有無(wú)黑化、適度的運(yùn)輸操作對(duì)該試驗(yàn)中牙鲆6種免疫學(xué)指標(biāo)的影響不顯著。

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