世緯苣苔模式產(chǎn)地的考證

劉明濤 余躍生 劉承貴 徐英志 陳明 劉靜

摘 要：? ?世緯苣苔是中國特有珍稀植物，但在《中國植物志》記載的模式產(chǎn)地貴州省“平伐”從未找到過該植物。模式產(chǎn)地考證信息的缺失，會在世緯苣苔的鑒定和相關科學研究中產(chǎn)生一定的混亂。作者從產(chǎn)地記載、標本形態(tài)、分子證據(jù)三個方面進行了考證，確認了世緯苣苔模式產(chǎn)地是貴州省“平壩”（安順市），而《中國植物志》所記載的模式產(chǎn)地是對模式標本原始記錄的錯誤翻譯。考證結(jié)果提供了正確的模式產(chǎn)地，使世緯苣苔的鑒定、保護、研究具有了切實可靠的依據(jù)。

關鍵詞：? 石山苣苔屬， 標本， 形態(tài)， 鑒定

中圖分類號：? ?Q949

文獻標識碼：? ? A

文章編號：? ?1000-3142（2020）10-1450-07

Textual research on type locality of Petrocodon scopulorum

LIU Mingtao1， YU Yuesheng1， LIU Chenggui1， XU Yingzhi1， CHEN Ming1* ， LIU Jing2

（ 1. Qiannan Medical College for Nationalities， Duyun 558000， Guizhou， China; 2. Institute of Botany， Chinese Academy of Sciences， Beijing 100093， China ）

Abstract：? ?Petrocodon scopulorum （Chun） Y. Z. Wang is a rare plant endemic to China. However， it has never been found in the “Pingfa” area of Guizhou Province， the type locality of P. scopulorum recorded in Flora Reipublicae Popularis Sinicae. The lack of textual information of the type locality will inevitably brings chaos to the identification and related research of P. scopulorum. In this study， the morphology and molecular analyses as well as textual analyses of protologue confirmed that the type locality of P. scopulorum was “Pingba”， Anshun City. While the type locality recorded in Flora Reipublicae Popularis Sinicae is an incorrect translation of the original record of the type specimen. The results here provide a correct type locality record and also a reliable basis for the identification， conservation and research of the P. scopulorum.

Key words：? Petrocodon， specimen， morphology， identification

世緯苣苔[Petrocodon scopulorum （Chun） Y.Z. Wang （previous Tengia scopulorum Chun）]（Wang et al.， 2011），又名黔苣苔，為中國特有珍稀植物;《貴州植物志》（李永康等，1989）記載“產(chǎn)貴定;模式標本采自平伐”，《中國植物志》（王文采等，1990）記載“產(chǎn)貴州平伐（位于貴陽東南）”。然而，“自從鄧世緯1935年采到世緯苣苔并由陳煥鏞教授建立世緯苣苔屬后，國內(nèi)及省內(nèi)植物學家雖然曾多次深入到模式標本產(chǎn)地，但均未發(fā)現(xiàn)”（徐文芬和何順志，2005）。缺乏模式產(chǎn)地材料，必然對世緯苣苔的鑒定和科學研究造成一些障礙，比如NCBI上的世緯苣苔分子數(shù)據(jù)多來源于壺花黔苣苔 [previous Tengia potiflora S. Z. He， T. sco-pulorum var. potiflora （S. Z. He） W. T. Wang]（Wang et al.， 2011），用這些數(shù)據(jù)輔助世緯苣苔的來源鑒定就有可能造成偏差。壺花黔苣苔的系統(tǒng)地位本身就存在不同意見，何順志和叢曉東（1992）根據(jù)在貴州省修文縣采集到的一個世緯苣苔屬的居群發(fā)表了壺花黔苣苔（Tengia potiflora S. Z. He），隨后Flora of China（Wang et al.， 1998）將其修訂為變種，李振宇和王印政（2005）將其合并。因此，世緯苣苔模式產(chǎn)地材料的獲取就尤為重要，然而在模式產(chǎn)地“平伐”卻從來沒有找到過該植物。作為該模式產(chǎn)地研究機構(gòu)，有責任搞清找不到世緯苣苔的原因。在中國科學院植物研究所的幫助下，作者從產(chǎn)地記載、標本形態(tài)、分子證據(jù)三方面進行了考證，確認了世緯苣苔真正的模式產(chǎn)地是貴州省“平壩”（安順市），而非“平伐”（貴定縣）。

1 文獻資料核查， 發(fā)現(xiàn)模式產(chǎn)地

經(jīng)多次深入到植物志記載的模式產(chǎn)地（貴定縣平伐）進行野外調(diào)查，均未發(fā)現(xiàn)世緯苣苔的分布。因此，專程前往華南植物園標本館查對了模式標本，模式標本原始記錄如下：采集地點為Kiao-Feng-San，Pinpa;采集人為S. W. Teng;采集日期為1935年8月15日（圖1）。

根據(jù)文獻資料核查和野外調(diào)查結(jié)果，作者懷疑植物志模式產(chǎn)地記載有誤。2018年實地調(diào)查發(fā)現(xiàn)，位于貴州省（GUIZHOU，舊音為KWEICHOW）安順市平壩（Pingba，舊音為Pinpa）區(qū)（縣）的高峰山（Gao-Feng-Shan，舊音為Kiao-Feng-San）不僅有世緯苣苔的分布，而且在一座山上多點廣泛分布，植株數(shù)量眾多。同時，華南植物園標本館在其網(wǎng)頁“前賢風范”中介紹，鄧世緯（Deng Shi-Wei，舊音為S. W. Teng）“1935年返貴州，任安順府志局調(diào)查員，調(diào)查安順附近各縣植物”，從采集時間上（1935年8月）印證了世緯苣苔模式標本采集地是安順市平壩。另外，F(xiàn)lora of China對該產(chǎn)地Guizhou（Pingba County）作了記載，但未明確其模式產(chǎn)地。

綜合模式標本原始記錄、野外實地調(diào)查、模式標本采集時間與采集者行蹤對應等因素，可以斷定世緯苣苔真正的模式產(chǎn)地是貴州省安順市平壩區(qū)（縣）高峰山。

2 標本來源鑒定， 確證模式產(chǎn)地

2018年7月24日，作者前往平壩高峰山進行了標本采集，編號為2018072402（圖2）。高峰山世緯苣苔標本與模式標本特征十分吻合， 植株和花都纖小。

世緯苣苔野外形態(tài)與花的解剖如下（圖3），花冠裂片5裂至花朵的1/3左右，雄蕊5，花藥橫狀縱裂。花期7月—8月。

通過標本和形態(tài)的比對鑒定，我們所考證的地址——安順市平壩所分布的世緯苣苔與世緯苣苔模式標本上所呈現(xiàn)的所有特征都相符，從植物經(jīng)典分類學和形態(tài)學的角度看，可以確定安順市平壩區(qū)高峰山是世緯苣苔模式標本產(chǎn)地無疑。

3 分子證據(jù)調(diào)取， 確定模式產(chǎn)地世緯苣苔的系統(tǒng)位置

調(diào)取目前經(jīng)考證認定的模式產(chǎn)地——安順平壩所分布的世緯苣苔rDNA的ITS序列（引物ITS1：5′-TCCGTAGGTGAACCTGCGG-3′，ITS4：5′-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3′），并利用NCBI上現(xiàn)有的石山苣苔屬ITS序列構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹，確定模式產(chǎn)地世緯苣苔的系統(tǒng)位置。

3.1 材料

采集安順平壩世緯苣苔當年生、近成熟、健康的新鮮葉片，用硅膠干燥封存（高連明等，2012）。

3.2 ITS序列獲取

3.2.1總DNA提取? 取安順平壩世緯苣苔硅膠干燥的葉片2組，采用改良后的CTAB法分別提取基因組總DNA。

3.2.2 PCR擴增和測序? PCR反應體系（20 μL）： 10 × Buffer? 2 μL;dNTP（2.5 mmol·L-1），1.6 μL;DDH2O? 11.3 μL;Taq酶? 0.1 μL;DNA模板? 1 μL;正向引物（2 mmol·L-1） 2 μL; 反向引物（2 mmol·L-1） 2 μL。

PCR反應程序： 94 ℃，4 min; （94 ℃，45 s;54 ℃，45 s;72 ℃，45 s） 32個循環(huán);72 ℃，10 min。

PCR產(chǎn)物用1%瓊脂糖的凝膠電泳檢測后，送華大基因進行測序。

3.2.3 測序結(jié)果? Petrocodon scopulorum 1-平壩的ITS序列：TTCCGTAGGTGAACCTGCGGAAGGATCA

TTGTCGAAACCTGCAAATCTGACCCGTGAACATGT

TCAAACGTTCTTGCGTTCGCGATGGTGGATGCTTC

TTGCGTCCAACATCACGACCTCGACCCCAAGCGGC

GCAAGTCTCTTGGGCGTACCAACCTCTCGGCGCGG

AAAGCGCCAAGGAAAAGCATACCGAACGCCTCTC

CATCCTGGTGCTGTTCGCGGTACCCAGGACGTGAC

GAGGAGCGTCTATTGAGTATAGATATAACGACTCT

CGGCAACGGATATCTCGGCTCTCGCATCGATGAAG

AACGTAGCGAAATGCGATACTTGGTGTGAATTGCA

GAATCCCGTGAACCATCGAGTCTTTGAACGCAAGT

TGCGTCCGAAGCCATCAGGCTGAGGGCACGTCTGT

CTGGGCGTCACGCGTCTCGTCGCCCCCTCCCACAT

CTTCTTCCCCCACTCGAGGGTGCCGGGAGATGATG

GCGCACGAAGGAGGGGCGGATATTGGCCTCCCGT

TGTCCTTGTGTAGCGGCTGGCACAAATAACATACC

GTGTCGAAGGAAGTCACACGATACGTGGTGGTTG

GATTCCTCAACTTGCGAGCTGTCGTGTAGGACTGC

ATCGAGCCACGGGCACGACCCAATGGCGAAAGGT

CGCCCTCGATCGCGACCCCAGGTCAGGCGGGATC

ACCCGCTGAGTTTAAGCATATCAAT。

Petrocodon scopulorum 2-平壩的ITS序列：

GTAGGTGAACCTGCGGAAGGATCATTGTCGA

AACCTGCAAATCTGACCCGTGAACATGTTCAAACG

TTCTTGCGTTCGCGATGGTGGATGCTTCTTGCGTCC

AACATCACGACCTCGACCCCAAGCGGCGCAAGTCT

CTTGGGCGTACCAACCTCTCGGCGCGGAAAGCGCC

AAGGAAAAGCATACCGAACGCCTCTCCATCCTGGT

GCTGTTCGCGGTACCCAGGACGTGACGAGGAGCG

TCTATTGAGTATAGATATAACGACTCTCGGCAACG

GATATCTCGGCTCTCGCATCGATGAAGAACGTAGC

GAAATGCGATACTTGGTGTGAATTGCAGAATCCCG

TGAACCATCGAGTCTTTGAACGCAAGTTGCGTCCG

AAGCCATCAGGCTGAGGGCACGTCTGTCTGGGCGT

CACGCGTCTCGTCGCCCCCTCCCACATCTTCTTCCC

CCACTCGAGGGTGCCGGGAGATGATGGCGCACGA

AGGAGGGGCGGATATTGGCCTCCCGTTGTCCTTGT

GTAGCGGCTGGCACAAATAACATACCGTGTCGAAG

GAAGTCACACGATACGTGGTGGTTGGATTCCTCAA

CTTGCGAGCTGTCGTGTAGGACTGCATCGAGCCAC

GGGCACGACCCAATGGCGAAAGGTCGCCCTCGATC

GCGACCCCAGGTCAGGCGGGATCACCCGCTGAGTT

TAA。

3.3 系統(tǒng)發(fā)育樹構(gòu)建

利用最新獲取的安順平壩ITS序列，根據(jù)已有的研究結(jié)果 （Wang et al.， 2011; Weber & Middleton， 2011） ，選取報春苣苔屬的煙葉苣苔為外類群，選取10個石山苣苔屬物種為內(nèi)類群，從NCBI上獲取相關物種的ITS序列（表1）。ITS序列首先使用軟件Clustal W（Larkin et al.， 2007）自動比對，然后在軟件Geneious v.7.1.8（Biomatters， 2014）中手動校正。最后將數(shù)據(jù)上傳至CIPRES網(wǎng)站，利用軟件RAxML（Stamatakis， 2014） 進行最大似然樹的構(gòu)建（圖4）。

從系統(tǒng)樹可以看出， 所取樣的石山苣苔屬物種形成了三個比較好的分支。采自安順平壩的世緯苣苔的兩個個體位于分支3中，它們以很高的支持率聚為一支后又與之前認定為世緯苣苔的類群聚為一支，并得到了最大支持率。這說明模式產(chǎn)地所分布的世緯苣苔與之前認定的世緯苣苔（Wang et al.， 2011; Weber & Middleton， 2011）為系統(tǒng)關系最近的類群，從而進一步驗證了形態(tài)鑒定的準確性。

4 討論與結(jié)論

綜上所述，世緯苣苔模式產(chǎn)地確定是貴州省安順市平壩區(qū)高峰山。植物志記載的“貴定縣平伐”是對模式標本記錄的錯誤翻譯。

錯誤翻譯在（1935采集-1946發(fā)表-2018考證）沒有得到糾正，主要有兩個原因。一是模式標本采集者都已殉難。1936年8月—10月，鄧世緯與助手由黔中往貞豐縣采集植物標本，不幸感染惡性瘧疾，于10月13日-17日，與助手楊昌漢、徐方才、黃孜文共四（或五）人相繼因病去逝（Chun， 1946;韋毅剛等，2010;華南植物園標本館網(wǎng)頁，2018）。二是陳煥鏞在建屬時發(fā)表的產(chǎn)地記載為“KWEICHOW： Pinfa， Chiu-Feng Shan”（Chun， 1946），這給植物志模式產(chǎn)地記載翻譯帶來了極大困惑。而今作者考證確認了世緯苣苔模式產(chǎn)地，采集制作了用漢字標注的世緯苣苔模式產(chǎn)地標本，為世緯苣苔的鑒定、保護、研究提供了重要依據(jù)。

模式標本的重要性不言而喻，世緯苣苔模式標本更是意義非凡。其一，它是對標本采集者鄧世緯等的紀念;其二，它是我國植物研究先輩陳煥鏞先生等歷經(jīng)抗日戰(zhàn)爭、解放戰(zhàn)爭，冒生命危險保存下來的。但是，對標本記載信息的誤讀誤載，導致后續(xù)的研究者多次前往錯誤記載的地域——平伐，卻無法找到該模式產(chǎn)地植物，浪費了財力物力，很多研究結(jié)論也缺少了可靠的參照系。壺花黔苣苔相對于模式世緯苣苔的形態(tài)變異是切實存在的，主要是花冠的閉合部分延長呈現(xiàn)壺狀;至于是種間變異還是種內(nèi)變異，還需要進一步地深入研究。更迫切的是，壺花黔苣苔在被發(fā)表的時候十分稀少（何順志和叢曉東，1992），目前已經(jīng)極度瀕危，急待保護。

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（ 責任編輯 周翠鳴 ）