胃癌患者組織中p53、axin蛋白表達與hp感染和病理特征的關系分析

梁仁杰,衛利民,徐 斌,趙治國，喬 亮

(河南科技大學第一附屬醫院 腫瘤外科,河南 洛陽471000)

胃癌是臨床中常見的惡性腫瘤之一，以食欲下降、體重減輕、疼痛、飽脹等為主要臨床表現，具有發病率及死亡率高的特點，對人類的生命健康危害極大[1]。據流行病學調查資料顯示[2]，目前我國每年約有67.9萬新發胃癌病例，其中約有49.8萬因胃癌死亡。胃癌的發生發展是較為復雜的病變過程，一般與多種原癌及抑癌基因的表達及調控有關。P53是人體中一種常見的抑癌基因。據報道[3]，P53基因參與胃癌的發生、發展過程。軸蛋白(Axin)是一種Axin基因編碼的構架蛋白。有研究顯示[4]，Axin與細胞的分化、增殖和凋亡均有密切關系，甚至可能參與腫瘤轉移及浸潤。幽門螺旋桿菌(Helicobacter pylori，Hp)是一種生存于人體胃幽門部位的螺旋形、微厭氧的細菌病原體之一，具有較強的潛伏性、侵襲性。另有研究指出[5]，Hp感染是胃癌發生過程的啟動及促進因子。結合上述研究可知，P53、Axin蛋白及Hp感染均與胃癌的發生過程存在關聯，但目前關于胃癌患者組織中P53、Axin蛋白表達與Hp感染和病理特征的具體關系尚不明確，仍需深入探討。鑒于此，本研究通過回顧性分析醫院收治的88例經病理證實的胃癌患者的臨床資料，以期為胃癌發生的分子機制、早期診斷及預后判定等提供相關依據。

1 資料與方法

1.1 一般資料

回顧性分析2017年2月-2019年5月醫院收治的88例經手術切除并病理證實的胃癌患者的臨床資料，男48例，女40例，年齡30-80歲，平均(65.86±13.19)歲，胃癌組織學分類：高、中分化56例，低分化32例，浸潤深度：黏膜/黏膜下層52例，肌層/漿膜層36例。

納入標準：均符合胃癌診斷標準者[6]，均實施P53、Axin蛋白及Hp感染檢測，均有完整的臨床資料。

排除標準：伴有精神疾病及語言溝通障礙者；存在其他重要器官疾病或腫瘤史者；家屬拒絕對其資料回顧分析者；術前放化療者。

1.2 方法

Hp感染檢測方法：采用Warthin-Starry銀染法檢測Hp感染情況，所用試劑由上海生工生物技術公司提供。具體操作：收集新鮮組織，采用Warthin-Starry銀染液對組織染色，并對染色結果觀察，其中觀察粘膜淺層可見呈弧形或S形Hp小短桿狀菌，且呈棕黑至黑色者，記為陽性。

P53蛋白、Axin蛋白的檢測方法：采用免疫組化SP法檢測P53蛋白、Axin蛋白的表達水平，所用試劑為北京天根生物公司提供。具體操作：收集新鮮胃癌組織及癌旁組織(距胃癌組織邊緣5 cm以上的正常胃黏膜組織)，用4%體積分數的甲醛固定，并石蠟包埋。將蠟塊進行4 μm/片的切片，免疫組化SP染色依據試劑盒說明書操作。采用已知的陽性片作為陽性對照。P53陽性細胞及Axin陽性細胞判斷標準：P53定位于細胞核，Axin定位于細胞漿，通過顯微鏡觀察，細胞核或細胞漿中發現棕黃色顆粒沉淀的細胞記為陽性細胞。隨機選取10個視野，以陽性染色細胞占比≥10%者記為對應蛋白陽性表達。

1.3 觀察指標

①統計本組受試者胃癌組織及癌旁組織中P53、Axin蛋白表達情況；②對比Hp感染者和未感染者胃癌組織P53、Axin蛋白表達情況；③對比不同病理特征患者胃癌組織中P53、Axin蛋白表達情況。

1.4 統計學分析

將SPSS25.0軟件作為統計學工具，計數資料以“n/%”描述，采用χ2檢驗。P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 本組受試者胃癌組織及癌旁組織中P53、Axin蛋白表達情況

胃癌組織中P53蛋白陽性表達率顯著高于癌旁組織(P<0.05)，胃癌組織中Axin蛋白陽性表達率顯著低于癌旁組織(P<0.05)。見表1及圖1，2。

表1 P53、Axin蛋白在胃癌組織及癌旁組織中表達情況(%)

圖1 P53蛋白免疫組化檢測圖(A：癌旁組織中P53蛋白的陰性表達，B：胃癌組織中P53蛋白的陽性表達，40倍)

圖2 Axin蛋白免疫組化檢測圖(C：癌旁組織中Axin蛋白的陽性表達，D：胃癌組織中Axin蛋白的陰性表達，200倍)

2.2 Hp感染者和未感染者胃癌組織P53、Axin蛋白表達情況對比

所有入選患者中共50例(56.82%)發生Hp感染，38例(43.18%)未發生Hp感染。Hp感染者的P53蛋白陽性表達率顯著高于未感染者(P<0.05)，Axin蛋白陽性表達率顯著低于未感染者(P<0.05)，見表2。

表2 Hp感染者和未感染者P53、Axin蛋白表達情況對比(%)

2.3 不同病理特征患者胃癌組織中P53、Axin蛋白表達情況對比

低分化程度、有淋巴結轉移、浸潤肌層/漿膜層的患者的P53蛋白表達率顯著高于高、中分化程度、無淋巴結轉移、浸潤黏膜/黏膜下層的患者的P53蛋白陽性表達率(P<0.05)，低分化程度、有淋巴結轉移、浸潤肌層/漿膜層的患者的Axin蛋白陽性表達率顯著低于高、中分化程度、無淋巴結轉移、浸潤黏膜/黏膜下層的患者的Axin蛋白陽性表達率(P<0.05)，腫瘤直徑(腫瘤直徑≤4 cm或腫瘤直徑>4 cm)的患者的P53、Axin蛋白陽性表達率相近(P>0.05)，見表3。

表3 不同病理特征患者胃癌組織中P53、Axin蛋白表達情況對比

3 討論

胃癌在我國各種惡性腫瘤中發病率居前幾位，且因胃癌早期并無明顯的特異性癥狀，多數患者在就診時已處于進展期，故此類患者的5年生存率低，危害嚴重[7]。胃癌常見的病因包括遺傳因素、環境因素、Hp感染、原癌基因激活及抑癌基因缺失突變等，均可導致細胞增殖與凋亡失控，進而誘導病情進展[8,9]。胃癌患者之所以出現細胞增殖與凋亡的失控，根本原因在于基因突變所致的細胞增殖和凋亡調控蛋白的異常表達，致使癌細胞大量增殖和分化[10]。P53、Axin是人體重要的抑癌基因，P53、Axin蛋白可以抑制細胞凋亡、促進細胞分化，與胃癌的發生和發展之間關系密切[11]。另有研究顯示[12]，Hp感染所引發的胃黏膜慢性炎癥加之環境因素可以加速胃黏膜上皮細胞的過度增殖，最終導致胃癌的發生。但是，目前關于胃癌患者組織中P53、Axin蛋白表達與Hp感染和病理特征的關系認識尚淺，仍需要深入研究。

本研究發現，經免疫組化檢測出胃癌組織中P53蛋白陽性表達率顯著高于癌旁組織，Axin蛋白陽性表達率顯著低于癌旁組織，提示胃癌患者組織中存在P53、Axin蛋白異常表達情況，同時也說明P53、Axin蛋白參與胃癌的發生發展過程。與既往研究相符[13,14]。正常情況下P53蛋白的半衰期短，并且極不穩定，非常容易失活，常規的蛋白檢測方法很難測出[15]，若結果檢出P53蛋白則意味著該基因已經發生突變，而突變型的基因所表達P53蛋白可參與惡性腫瘤細胞的增殖，促進細胞分化，對胃癌的發生和病情進展有重要的推動作用。Axin作為重要的抑癌基因，含有多個功能結構域，為目前公認的抑癌基因，采用基因干擾技術增強其表達水平可抑制惡性腫瘤細胞的增殖、促進凋亡[16]，且在多種惡性腫瘤組織中均被證實其表達水平下降[17-19]，推測Axin表達被抑制，可參與胃癌的發生與發展，并增強胃癌細胞的惡性生物學行為。此外Axin可以與P53結合參與P53信號通路，并通過同源結構域結合蛋白激酶2激活野生型P53，從而促進抑癌基因P53的轉錄活性和細胞凋亡作用。此外，Axin與突變型P53相互作用，共同下調β-catenin的表達，協同發揮腫瘤抑制因子的作用。通過上述分析可知，突變型P53與Axin呈負相關作用，二者共同參與胃癌的發生發展過程。

本研究發現，胃癌組織中Hp感染陽性率高，且Hp感染者的P53蛋白及Axin蛋白陽性表達率顯著高于未感染者，提示胃癌患者多伴有Hp感染，且伴Hp感染者存在P53、Axin蛋白表達異常情況。Hp是誘發胃癌的啟動因子，能夠誘導加速細胞有絲分裂，損傷細胞DNA，并激活原癌基因，使抑癌基因失活，導致胃癌基因的異常表達，從而增加癌變風險。有研究顯示[20]，Hp感染可引發胃黏膜上皮細胞出現慢性炎癥反應而損傷胃黏膜上皮細胞，進而促進P53、Axin基因突變，致使胃黏膜上皮細胞的凋亡能力降低，并導致胃黏膜上皮細胞增殖及凋亡功能發生紊亂，引發細胞堆積，從而導致腫瘤的形成。由此推測Hp感染可能導致胃黏膜上皮細胞P53基因及Axin基因發生突變，從而使P53表達增強，Axin蛋白表達降低，進而參與胃癌的發生與發展。

此外，本研究還顯示，P53蛋白在有淋巴結轉移、低分化、浸潤肌層/漿膜層的胃癌組織中陽性表達率高，Axin蛋白在有淋巴結轉移、低分化、浸潤肌層/漿膜層的胃癌組織中陽性表達率低，提示伴Hp感染胃癌患者組織中P53、Axin蛋白表達與胃癌分化程度、淋巴結轉移、浸潤深度等病理特征關系密切。姜志新[21]等人研究顯示，P53蛋白在有淋巴結轉移、低分化的胃癌組織中表達量高。趙磊[22]研究發現，Axin蛋白在有淋巴結轉移、低分化的胃癌組織中表達量減少或者缺失，與本研究結果相符，證實胃癌伴Hp感染者組織中P53、Axin蛋白均呈異常表達，P53、Axin核蓄積可能為胃癌發生及發展的病理過程中重要組成部分，二者可作為胃癌發生早期的評價指標之一。通過上述分析可知，伴Hp感染胃癌組織中P53、Axin蛋白表達情況與不同病理特征關系密切，且P53基因突變可能下調Axin蛋白的表達，進而增加胃癌的擴散及轉移發生幾率，但具體機制仍有待研究。

綜上所述，胃癌伴Hp感染者組織中P53蛋白陽性表達率高、Axin蛋白陽性表達率低，且二者陽性表達率與胃癌組織分化程度、有無淋巴結轉移、浸潤深度的病理特征存在關聯。因此，建議臨床上對伴有Hp感染的胃癌前病變患者加強P53、Axin蛋白的檢測，并及時給予針對治療，以降低胃癌的發生。