血清TLR4及MFG-E8與子癇前期患者表達(dá)及發(fā)生早期腎損傷的關(guān)系

任春麗,唐興國,張玉芳,袁曉明

(1.承德醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院 產(chǎn)科，河北 承德067000;2.承德護(hù)理職業(yè)學(xué)院 解剖教研室，河北 承德067000)

子癇前期(PE)是妊娠特有的疾病，在妊娠20周之后發(fā)生，病情隨妊娠呈持續(xù)性進(jìn)展，最常見的并發(fā)癥之一就是引起急性腎損傷[1]，研究顯示TOLL受體4(TLR4)和乳脂肪球表皮生長因子Ⅷ(MFG-E8)均與急性腎損傷病理機(jī)制有關(guān)[2,3]，本研究探討TLR4和MFG-E8在子癇前期患者中的表達(dá)與診斷意義，并探討其與子癇前期發(fā)生早期腎損傷的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 病例資料

選取在我院住院治療的妊娠期高血壓(GH)患者30例，輕度子癇前期(mPE)患者30例、重度子癇前期(sPE)30例以及正常妊娠(NP)患者30例為研究對象。妊娠期高血壓及子癇前期患者診斷及分類均符合第九版《婦產(chǎn)科學(xué)》診斷標(biāo)準(zhǔn)。正常孕婦的年齡(32.07±3.58)歲，高血壓組孕婦年齡(32.66±3.91)歲，輕度子癇前期組孕婦年齡(34.77±3.51)歲，重度子癇前期組孕婦年齡(34.01±3.72)歲。組間比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。

1.2 方法

兩組患者均在分娩前晨起空腹采取肘正中靜脈血5 ml，實(shí)驗(yàn)室離心10 min后取上層血清于-80°冰箱保存已備用。采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA法)進(jìn)行檢測兩組患者血清中TLR4和MFG-E8的表達(dá)水平，具體所有操作均按試劑盒操作說明進(jìn)行。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 不同組別外周血TLR4與MFG-E8表達(dá)水平比較外周血TLR4在正常孕婦、妊娠期高血壓、輕度子癇前期、重度子癇前期，隨病情加重呈逐漸升高趨勢，多組間進(jìn)行單因素方差分析，組間兩兩比較：各組間均有顯著性差異(P<0.01)，仍具有顯著性差異(P<0.01)。外周血MFG-E8在正常孕婦、妊娠期高血壓、輕度子癇前期、重度子癇前期，隨病情加重呈逐漸降低趨勢，多組間進(jìn)行單因素方差分析，組間兩兩比較：各組間差異均有顯著性差異(P<0.01)，見表1。

表1 組間外周血TLR4和MFG-E8表達(dá)水平比較

2.2 外周血TLR4與MFG-E8的相關(guān)性比較在正常孕婦組，外周血TLR4與MFG-E8表達(dá)水平呈負(fù)相關(guān)，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，r=-0.345，P=0.062；在妊娠期高血壓組，外周血TLR4與MFG-E8表達(dá)水平呈負(fù)相關(guān)，r=-0.390，P=0.033；在子癇前期組，隨著子癇前期病情進(jìn)展，外周血TLR4與MFG-E8表達(dá)水平呈明顯負(fù)相關(guān)，r=-0.799，P=0.000，見圖1；在重度子癇前期并發(fā)早期腎損傷的病例為42例，外周血TLR4與MFG-E8表達(dá)水平呈顯著負(fù)相關(guān)，r=-0.875，P=0.000，見圖2。隨著外周血TLR4水平逐漸升高，MFG-E8的表達(dá)水平呈下降趨勢。

2.3 外周血TLR4與MFG-E8診斷子癇前期的價值外周血TLR4與MFG-E8表達(dá)水平診斷子癇前期的敏感度分別為83.33%、78.33%，特異度分別為80.00%、86.67%；TLR4聯(lián)合MFG-E8診斷PE的敏感度98.00%，特異度78.57%；TLR4、MFG-E8及TLR4聯(lián)合MFG-E8診斷PE的ROC曲線下面積分別是0.850、0.889及0.928，見表2；ROC曲線見圖3。

表2 TLR4、MFG-E8以及TLR4聯(lián)合MFG-E8對診斷子癇前期的預(yù)測價值

圖1 PE患者TLR4與MFG-E8的相關(guān)性

圖2 PE合并急性腎損傷的TLR4與MFG-E8的相關(guān)性

圖3 TLR4、MFG-E8、TLR4聯(lián)合MFG-E8的ROC曲線

3 討論

子癇前期為妊娠代謝性疾病的一種，臨床表現(xiàn)多樣化，常導(dǎo)致腦、腎、肝、心血管等多個器官受累；發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，目前公認(rèn)原因之一是母胎界面炎癥免疫過度激活及血管內(nèi)皮細(xì)胞受損[4]。常因子癇前期患者病情隱匿而復(fù)雜，嚴(yán)重影響母嬰生命安全。近年來，因分子診斷，影像學(xué)診斷等技術(shù)水平提高，使得子癇前期的診斷水平明顯提升，但子癇前期的早期診斷仍是一個嚴(yán)峻的課題。本研究通過兩種炎癥介質(zhì)TLR4與MFG-E8提高子癇前期診斷敏感性及特異性，為子癇前期的早期診斷提高理論依據(jù)。

TLR4是Toll樣受體家族中重要的成員，Toll樣受體是連接特異性與非特異性免疫的橋梁，識別并激活免疫細(xì)胞應(yīng)答。研究顯示TLR4與子癇前期發(fā)病機(jī)制的相關(guān)性可能與TLR4參與炎癥反應(yīng)及炎癥損傷有關(guān)[5]。有研究顯示子癇前期合體滋養(yǎng)細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞中TLR4的表達(dá)也明顯高于正常孕婦組；在胎盤絨毛血管內(nèi)皮中，早發(fā)性子癇前期婦女胎盤中TLR4的表達(dá)高于晚發(fā)性子癇前期，表明子癇前期的嚴(yán)重程度與胎盤絨毛的炎癥損傷程度相關(guān)[6]。有研究顯示子癇前期婦女單核細(xì)胞內(nèi)源性激活，并伴有TLR4的高表達(dá)及促炎細(xì)胞因子的產(chǎn)生[7]。這些研究均與本研究相符合，本研究提示隨著子癇前期進(jìn)展，TLR4表達(dá)水平呈逐漸增高趨勢，且重度子癇前期>輕度子癇前期>妊娠期高血壓>正常孕婦(P<0.01)。

MFG-E8又稱乳凝集素，是一種糖蛋白，能夠維持機(jī)體免疫穩(wěn)態(tài)，具有凋亡清除、修復(fù)損傷、血管生成及減輕炎癥反應(yīng)等作用，是一種防御型因子[8]。目前國內(nèi)外研究MFG-E8與子癇前期的關(guān)系很少，但通過對急性腎損傷、妊娠期糖尿病、自身免疫系統(tǒng)疾病等能夠了解MFG-E8的生理作用。研究顯示[9]通過對急性腎損傷的重組小鼠進(jìn)行MFG-E8注射，MFG-E8對IL-1β、IL-6、TNF-α有明顯抑制作用(P<0.05)。MFG-E8能夠降低血清CRE、BUN，減輕急性損傷的病理變化。有人對糖尿病腎病中MFG-E8表達(dá)研究中顯示：MFG-E8與肌酐、胱抑素C呈負(fù)相關(guān)，表明MFG-E8對凋亡細(xì)胞吞噬功能減弱，對炎癥因子的免疫抑制作用減弱，導(dǎo)致腎臟損傷[10]。有研究顯示[11]：系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)患者血清MFG-E8水平高于健康對照組，MFG-E8水平轉(zhuǎn)陰后，MFG-E8陰性的SLE患者常表現(xiàn)出CRP、TNF-α、IFN-1和IL-10均顯著高于在MFG-E8陽性的SLE。從而得出結(jié)論MFG-E8陽性SLE是一個更強(qiáng)的免疫應(yīng)答。本研究中顯示子癇前期患者隨病情加重，血清MFG-E8表達(dá)水平呈逐漸下降趨勢，且重度子癇前期<輕度子癇前期<妊娠期高血壓<正常孕婦(P<0.01)。

TLR4與MFG-E8在子癇前期及子癇前期并發(fā)早期腎損傷患者中表達(dá)呈明顯負(fù)相關(guān)。推斷可能是由于TLR4誘導(dǎo)PE患者母胎介面炎癥因子及單核細(xì)胞激活，而不能抵御炎癥攻擊的MFG-E8水平下降，導(dǎo)致其不能發(fā)揮正常狀態(tài)下維持免疫穩(wěn)定的作用，破壞了免疫平衡，從而加重子癇前期及并發(fā)急性腎損傷的發(fā)生[12]。本研究顯示：隨著子癇前期病情進(jìn)展，外周血TLR4與MFG-E8表達(dá)水平呈負(fù)相關(guān)(r=-0.799，P=0.000)；在子癇前期并發(fā)早期腎損傷的病例中，外周血TLR4與MFG-E8表達(dá)水平呈明顯負(fù)相關(guān)(r=-0.875，P=0.000)。而TLR4聯(lián)合MFG-E8對診斷子癇前期敏感性明顯升高，特異度略下降，敏感度98.00%，特異度78.57%，ROC曲線下面積：0.928。

綜上所述，TLR4與MFG-E8均密切參與子癇前期發(fā)病機(jī)制，且隨病情進(jìn)展，TLR4表達(dá)水平呈逐漸升高趨勢，而MFG-E8則呈下降趨勢，兩者之間呈負(fù)相關(guān)，PE患者并發(fā)早期急性腎損傷時TLR4與MFG-E8負(fù)相關(guān)更明顯。TLR4與MFG-E8對診斷子癇前期的預(yù)測價值很高，如兩者聯(lián)合，診斷的敏感性明顯升高，為臨床上子癇前期患者的早期診斷、早期治療提高可靠依據(jù)。