槲皮素調(diào)控AMPK/mTOR通路對(duì)肺癌A549細(xì)胞自噬的影響①

文蘭香 覃世運(yùn) 陳麗君

(海南省第三人民醫(yī)院腫瘤中心，三亞 572000)

肺癌是發(fā)生于支氣管黏膜上皮的惡性腫瘤，發(fā)病率居男性惡性腫瘤的首位，近年來在女性中發(fā)病率也迅速提高，嚴(yán)重危害人類生命健康[1,2]。臨床上主要通過外科手術(shù)以及化療治療肺癌，但持續(xù)使用化療藥物會(huì)造成骨髓抑制，且易產(chǎn)生耐藥性[3]。中藥因具有保護(hù)骨髓、毒性較小等優(yōu)勢(shì)在現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究中占據(jù)一定地位，因此尋求毒副作用小、肺癌治療效果顯著的中醫(yī)藥物質(zhì)成為研究重點(diǎn)之一[4]。槲皮素是在植物中廣泛存在的黃酮類物質(zhì)，研究顯示其可能通過影響癌細(xì)胞自噬，在抗腫瘤中發(fā)揮重要作用[5,6]。自噬是真核細(xì)胞中存在的生理現(xiàn)象，是蛋白降解的一種途徑，對(duì)維持體內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定十分重要，大量研究顯示自噬作用與腫瘤發(fā)生發(fā)展存在密切聯(lián)系[7]。但槲皮素對(duì)肺部腫瘤的作用研究較少，因此本研究初步探討槲皮素對(duì)肺癌A549細(xì)胞自噬的影響以及可能的作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1材料

1.1.1細(xì)胞 人肺癌細(xì)胞系A(chǔ)549細(xì)胞購(gòu)自中國(guó)科學(xué)院細(xì)胞庫(kù)。

1.1.2藥物 槲皮素購(gòu)自美國(guó)Sigma公司(純度≥98%)，用0.05 mol/L的NaOH溶液配制成1 mmol/L槲皮素母液，過濾除菌后保存?zhèn)溆茫褂们坝煤?0% FBS的RPMI1640培養(yǎng)液稀釋至所需濃度。

1.1.3試劑 RPMI1640培養(yǎng)基、10%胎牛血清、胰酶購(gòu)自Thermo Hyclone公司；CCK-8相關(guān)試劑購(gòu)于美國(guó)Sigma公司；蛋白提取試劑盒、BCA試劑盒購(gòu)自北京全式金生物公司；鼠抗人LC3Ⅰ、LC3Ⅱ、beclin-1、p-AMPK、AMPK、p-mTOR、mTOR、p-S6K、S6K、GAPDH一抗購(gòu)及二抗(辣根過氧化物酶標(biāo)記羊抗鼠IgG)購(gòu)自美國(guó)Santa Cruz公司；單丹磺酰尸胺(monodansylcadaverin，MDC)染色試劑盒購(gòu)自金克隆(北京)生物技術(shù)有限公司；……