α-硫辛酸在衰老大鼠聽皮層線粒體氧化損傷中的作用

易志富龔鑫 楊雙丹

廣州醫科大學附屬第一醫院耳鼻咽喉科（廣州510120）

聽皮層位于聽覺中樞通路的終端，是聽覺感知的最高級中樞。老年性聾又稱為年齡相關性聽力損失(age-related hearing loss，AHL)，是導致老年人交流障礙的常見原因，在臨床上尚無特效藥物治療。隨著老齡化的到來，老年性聾患者數量將會大量增長[1,2]，研究老年性聾的病因及治療手段變得愈為緊迫。

本研究利用D-半乳糖（D-galactose,D-gal）誘導的衰老大鼠模型[3-5]，實驗觀察氧自由基清除劑α-硫辛酸（α-lipoic acid，α-LA）[6-8]對衰老大鼠聽皮層線粒體氧化損傷及線粒體超微結構的影響，從而探究α-硫辛酸治療中樞性老年性聾的可行性。

1 材料和方法

1.1 實驗動物

清潔級48只4周齡雄性SD大鼠，體重61g～75g，由廣州醫科大學實驗動物中心提供。動物室環境：室內相對溫度（23±1）℃，相對濕度（50±10）%。所有動物處死時均無中耳炎。所有實驗動物隨機分為3組（n=16）：① 對照組（NS）：腹腔注射生理鹽水500mg.(kg.d)-18周后，腹腔注射生理鹽水40mg.(kg.d)-18周；② 衰老組（D-gal）：腹腔注射D-半乳糖500mg.(kg.d)-18周后，腹腔注射生理鹽水40mg.(kg.d)-18周；③ 干預組（α-LA）：腹腔注射D-半乳糖500mg.(kg.d)-18周后，腹腔注射α-硫辛酸40mg.(kg.d)-18周。實驗大鼠麻醉方式：肌肉注射氯胺酮（30mg/kg）和氯丙嗪（15mg/kg）麻醉。

1.2 材料與試劑

D-半乳糖購自美國sigma公司，8-OHdG購自美國Abcam公司。H2O2、T-SOD、ATP、MMP檢測試劑盒均購于上海碧云天生物技術有限公司。

1.3 電鏡觀察線粒體超微結構

各實驗組選取4只大鼠，麻醉后經心臟快速灌注生理鹽水，沖凈血液后斷頭處死，取出顳葉聽皮層組織，2.5%戊二醛下固定至少2h。0.1M PBS清洗20min×4次，使用1%鋨酸后固定2 h，0.1M PBS清洗15min×5次。聽皮層組織行梯度脫水。浸入丙酮對半稀釋的低黏度包埋劑2h，再用低黏度包埋劑37℃烤箱滲透2h。……