CMV IgM抗體檢測(cè)及IgG抗體親和力分析對(duì)CMV原發(fā)性感染的診斷意義

孫健

【摘要】 目的：探討巨細(xì)胞病毒（cytomegalovirus，CMV）IgM抗體檢測(cè)及IgG抗體親和力分析對(duì)CMV原發(fā)性感染的意義。方法：選取2017年1-12月在本院80例CMV感染患者的臨床資料進(jìn)行回顧性分析。采集所有患者的血清標(biāo)本，經(jīng)間接免疫熒光法檢測(cè)CMV IgG抗體，采用免疫捕獲法檢測(cè)CMV IgM，分析CMV IgG抗體親和力。結(jié)果：所有患者的CMV IgG檢測(cè)均為陽(yáng)性，且稀釋度在1︰1 022～1︰14。其中40例CMV IgM抗體為陰性，40例CMV IgM抗體為陽(yáng)性。CMV IgM陰性與陽(yáng)性者AI值與CMV IgG抗體親和力比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論：在對(duì)CMV原發(fā)性感染診斷過(guò)程中，大部分CMV IgM抗體陽(yáng)性者并非近期原發(fā)性感染，不能根據(jù)單一的血清學(xué)檢測(cè)進(jìn)行診斷，CMV IgM抗體檢測(cè)聯(lián)合IgG抗體親和力分析有助于對(duì)CMV原發(fā)性感染確診。

【關(guān)鍵詞】 巨細(xì)胞病毒 原發(fā)性感染 CMV IgM CMV IgG抗體親和力

Significance of IgM Antibody Detection and IgG Antibody Affinity Analysis in the Diagnosis of Primary Infection of CMV/SUN Jian. //Medical Innovation of China， 2020， 17（22）： -122

[Abstract] Objective： To explore the significance of IgM antibody detection and IgG antibody affinity analysis in the diagnosis of primary infection of cytomegalovirus （CMV）. Method： The clinical data of 80 patients with CMV infection in our hospital from January to December 2017 were retrospectively analyzed. Serum samples were collected from all patients， CMV IgG antibody was detected by indirect immunofluorescence method， and CMV IgM was detected by immunocapture method， and the CMV IgG antibody affinity was analyzed. Result： CMV IgG was positive in all patients， and the dilution was 1︰1 022-1︰14. Among them， 40 cases were negative for CMV IgM antibody and 40 cases were positive for CMV IgM antibody. The AI values and CMV IgG antibody affinity of CMV IgM negative and positive patient were compared， the differences were statistically significant （P<0.05）. Conclusion： In the diagnosis of CMV primary infection， most of the patients with positive CMV IgM antibody were not recently infected and could not be diagnosed based on a single serological test. CMV IgM antibody detection combined with IgG antibody affinity analysis is helpful for the diagnosis of primary CMV infection.

[Key words] Cytomegalovirus Primary infection CMV IgM CMV IgG antibody affinity

First-authors address： Heilongjiang Jiamusi Maternal and Child Health Hospital， Jiamusi 154004， China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2020.22.031

臨床治療中，巨細(xì)胞病毒（CMV）屬一種皰疹類病毒，該病毒的感染情況在人群中較為常見(jiàn)，大多為隱匿性感染，臨床特征相對(duì)較少，新生兒、孕婦以及免疫力較為低下者極易出現(xiàn)CMV感染的情況，對(duì)其身體健康產(chǎn)生嚴(yán)重影響[1-2]。由于大部分CMV感染者并無(wú)顯著的臨床特征，因此僅靠癥狀對(duì)患者的病情進(jìn)行判定具有一定的困難。在孕期，尤其孕早期若出現(xiàn)CMV感染，則會(huì)對(duì)胎兒生長(zhǎng)發(fā)育情況造成嚴(yán)重影響，該階段是胎兒器官以及神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育的重要時(shí)期，極易導(dǎo)致后遺癥出現(xiàn)[3-4]。在臨床治療中，對(duì)CMV活動(dòng)性感染或近期感染主要通過(guò)CMV IgM抗體進(jìn)行判定，而對(duì)于CMV原發(fā)性感染或長(zhǎng)時(shí)間持續(xù)存在的IgM抗體等情況則不能夠進(jìn)行準(zhǔn)確判定[5]。近年來(lái)相關(guān)研究顯示，CMV原發(fā)性感染可通過(guò)進(jìn)行CMV IgG抗體親和力的分析而進(jìn)行有效評(píng)估與判定。低親和力抗體大多與近3個(gè)月內(nèi)原發(fā)性感染的情況存在一定的相關(guān)性，而高親和力抗體則能夠有效排除近期原發(fā)性感染的存在情況[6]。本研究探討了CMV IgM抗體檢測(cè)及IgG抗體親和力分析對(duì)CMV原發(fā)性感染的診斷意義，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2017年1-12月于本院就診以及住院的CMV感染的80例患者的臨床資料進(jìn)行回顧性分析。納入標(biāo)準(zhǔn)：所有患者的臨床資料均較為完整;疑似CMV感染并經(jīng)檢測(cè)CMV IgG抗體存在血清學(xué)轉(zhuǎn)換或CMV IgG、CMV IgM檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性;排除標(biāo)準(zhǔn)：患有嚴(yán)重的感染性或者免疫性疾病者;患有精神類疾病或者認(rèn)知功能障礙不能配合本研究者;中途退出本研究者。所有患者中男43例，女37例，年齡26～65歲，平均（45.1±3.2）歲;所有患者及家屬均知情同意并簽署知情同意書(shū)，本研究已經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 方法

1.2.1 標(biāo)本采集 于清晨抽取所有患者5 mL的空腹靜脈血，經(jīng)10 min離心后取其血清待測(cè)。

1.2.2 免疫熒光法檢測(cè)CMV IgG抗體 利用CMVAD169感染的人胚肺成纖維細(xì)胞進(jìn)行相應(yīng)的胰酶消化，并將相應(yīng)的細(xì)胞核進(jìn)行純化，然后在其中加入1/3正常的HEp-2細(xì)胞核，為內(nèi)參陰性的參照對(duì)比;在印制28孔的孔片中將上述細(xì)胞懸液放入其中并進(jìn)行滴涂，待干燥后采用丙酮進(jìn)行15 min的固定。對(duì)血清標(biāo)本進(jìn)行稀釋后將抗原片滴入其中，之后將其置于37 ℃的環(huán)境中進(jìn)行30 min的孵育，進(jìn)行PBS沖洗后，加入Evans藍(lán)稀釋并帶有熒光標(biāo)記的IgG抗體內(nèi)，同樣在37 ℃的環(huán)境中進(jìn)行孵育30 min，再次進(jìn)行PBS沖洗，用甘油封片，并放置于顯微鏡下進(jìn)行觀察。若細(xì)胞核呈腎形并且為翠綠色則為CMV感染陽(yáng)性，同時(shí)存在小而圓的HEp-2細(xì)胞核未存在熒光染色。

1.2.3 免疫捕獲法檢測(cè)CMV IgM抗體 檢測(cè)原理為抗IgM μ鏈捕獲酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（ELISA），CMV IgM抗體檢測(cè)的試劑盒由意大利DiaSorin公司提供，分別抽取所有患者的空腹靜脈血，經(jīng)離心后將其血清分離，然后按照1︰101的比例進(jìn)行稀釋，并將100 μL稀釋液加入含有IgM μ鏈抗體的96孔板中，在溫育60 min之后進(jìn)行洗滌酶標(biāo)板，然后采用辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的抗CMV抗體以及CMV抗原的混合物加入其中，再進(jìn)行溫育60 min。采用底物溶液在其洗滌后進(jìn)行顯色，30 min后終止操作。采用酶標(biāo)儀讀取吸光度值（OD值），當(dāng)標(biāo)本OD值/界限值孔的OD值后，若所得結(jié)果<0.9則為陰性，>1.1表示為陽(yáng)性，當(dāng)檢測(cè)的結(jié)果處于兩者之間時(shí)，則需進(jìn)行再一次檢測(cè)。

1.2.4 CMV IgG抗體親和力分析 按照1︰101稀釋后的100 μL標(biāo)本置入帶有CMV抗原的微孔板內(nèi)，每個(gè)標(biāo)本均加兩孔，并在室溫中進(jìn)行30 min的孵育;洗液洗板1次后，將200 μL的尿素加入標(biāo)本孔內(nèi)。另一孔采用PBS進(jìn)行參照，之后同樣置于室溫中，10 min后進(jìn)行3次洗板，并將100 μL的辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的第2抗體混合物加入其中，經(jīng)30 min的室溫孵育之后洗板3次，然后將100 μL的TMB底物加入其中，在室溫內(nèi)放置15 min后將450/620 nm的終止液加入其中并進(jìn)行相應(yīng)的比色實(shí)驗(yàn)。親和力指數(shù)（AI）=經(jīng)尿素處理標(biāo)本孔的OD值/未經(jīng)尿素處理標(biāo)本孔的OD值，所得結(jié)果若<30%則為低親和力抗體，在30%～60%則為中等親和力抗體，>60%則為高親和力抗體。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 18.0軟件對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料用（x±s）表示;計(jì)數(shù)資料以率（%）表示，比較采用字2檢驗(yàn)，等級(jí)資料比較采用秩和檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 CMV IgG抗體、IgM抗體OD值及AI值 所

有患者的CMV IgG檢測(cè)均為陽(yáng)性，且稀釋度在1︰1 022～1︰14。40例CMV IgM抗體為陰性，AI值54%～95%，平均（79.3±6.4）%。40例CMV IgM抗體為陽(yáng)性，AI值5.1%～99.1%，平均（61.7±5.9）%。兩者AI值比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=12.788，P<0.05）。40例CMV IgM抗體陽(yáng)性的IgM抗體OD值及AI，見(jiàn)表1。

2.2 CMV IgM陰性與陽(yáng)性者親和力比較 40例CMV IgM陰性者中，2例（5.0%）IgG抗體為中等親和力抗體，38例（95.0%）IgG抗體為高親和力抗體。40例CMV IgM陽(yáng)性中，9例（22.5%）IgG抗體為低親和力抗體;4例（10.0%）IgG抗體為中等親和力抗體;27例（67.5%）IgG抗體為高親和力抗體。CMV IgM陰性與陽(yáng)性者CMV IgG抗體親和力比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Z=5.416，P<0.05）。

3 討論

人類在感染CMV后大多不會(huì)出現(xiàn)任何癥狀，屬于亞臨床感染的一種，在全球范圍內(nèi)均有發(fā)生，且無(wú)任何季節(jié)性，感染率相對(duì)較高[7]。CMV出現(xiàn)原發(fā)性感染后，大多在內(nèi)皮細(xì)胞、白細(xì)胞以及機(jī)體組織中進(jìn)行潛伏。CMV感染通過(guò)對(duì)機(jī)體產(chǎn)生有效刺激進(jìn)而致使CMV IgM抗體的產(chǎn)生，而CMV IgG抗體大約會(huì)在2周之后出現(xiàn)，CMV IgM抗體則會(huì)緩慢消失，部分患者CMV IgM抗體消失的時(shí)間會(huì)存在顯著延長(zhǎng)的情況，因此，對(duì)患者在進(jìn)行病情判定的過(guò)程中若單憑CMV IgM抗體進(jìn)行CMV原發(fā)性感染的檢測(cè)，則容易導(dǎo)致誤診的情況出現(xiàn)，并且不利于是否為近期感染的情況進(jìn)行有效判定[8-10]。抗體親和力主要是指CMV IgG抗體與其抗原進(jìn)行有效結(jié)合的能力，通過(guò)對(duì)親和力進(jìn)行有效評(píng)估能夠?qū)颊吒腥镜臅r(shí)間進(jìn)行大致判定。若機(jī)體內(nèi)存在相對(duì)較低的親和力抗體，則表明患者感染的時(shí)間大約發(fā)生在3～5個(gè)月之內(nèi)，若患者機(jī)體內(nèi)的親和力抗體相對(duì)較高，則患者大約在幾個(gè)月或者幾年之內(nèi)存在感染[11-12]。CMV IgG抗體親和力較高且IgM為陽(yáng)性則表明患者存在遠(yuǎn)期CMV感染的狀況，患者的機(jī)體內(nèi)會(huì)具有IgM抗體持續(xù)存在的情況[13]。本研究40例CMV IgM陽(yáng)性者中，有9例CMV IgG抗體為低親和力，說(shuō)明為近期巨細(xì)胞病毒感染。4例CMV IgG抗體為中等親和力，并且其中有1例經(jīng)檢測(cè)其效價(jià)能夠達(dá)到1︰1 022，與此同時(shí)，在臨床中存在發(fā)熱的情況，經(jīng)過(guò)與臨床的診斷結(jié)果進(jìn)行合理分析顯示，該患者存在近期原發(fā)性感染的狀況;此外其余的3例患者則并未出現(xiàn)血清學(xué)變化的狀況，也并為存在較為顯著的臨床癥狀，因此并不能排除遠(yuǎn)期感染的情況。在進(jìn)行臨床診斷的過(guò)程中，雖然部分患者具有感染的情況，但由于其CMV感染的癥狀并未存在特異性，致使不能夠?qū)⑵渑c其他基礎(chǔ)類的疾病進(jìn)行有效區(qū)分。雖然其CMV IgM抗體顯示為陽(yáng)性，但仍有持續(xù)存在的CMV IgM抗體或者復(fù)發(fā)感染的可能[14]。對(duì)于存在自身免疫類疾病但身體狀況表現(xiàn)較為正常或者免疫力相對(duì)正常者而言，當(dāng)CMV IgM抗體持續(xù)存在或復(fù)發(fā)感染的情況出現(xiàn)時(shí)，并不會(huì)存在任何的臨床特征[15-16]。有關(guān)研究中表明，AI值為30%是CMV IgG抗體親和力有效判定的臨界點(diǎn)，CMV IgG抗體親和力分析具有相對(duì)較高的敏感度，甚至能夠達(dá)到100%，而特異度也在84.5%以上，僅從CMV IgG抗體檢測(cè)或者CMV IgM抗體檢測(cè)均不能夠?qū)MV感染的情況進(jìn)行有效判定[17-18]。本研究中顯示，在40例CMV IgM抗體為陽(yáng)性的患者中，CMV IgG抗體低親和力占比相對(duì)較低，僅為22.5%（9/40），而高親和力為67.5%（27/40）占比相對(duì)較高，其中僅有4例患者表現(xiàn)為中等親和力抗體。依據(jù)國(guó)內(nèi)外有關(guān)研究表明，大部分CMV IgM抗體顯示為陽(yáng)性的患者均不是近期產(chǎn)生的CMV，需經(jīng)CMV IgG抗體親和力評(píng)估進(jìn)而判斷其是否存在近期原發(fā)性CMV感染的情況[19-20]。目前臨床診斷中，對(duì)于CMV病原學(xué)的檢查較為缺乏，因此，不能夠單憑血清學(xué)的檢測(cè)對(duì)患者的診斷結(jié)果進(jìn)行評(píng)估，應(yīng)通過(guò)CMV IgM抗體檢測(cè)及IgG抗體親和力分析對(duì)CMV感染情況進(jìn)行有效評(píng)估，可在提高檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性的同時(shí)對(duì)患者目前的情況做出準(zhǔn)確判定。

綜上所述，在CMV原發(fā)性感染診斷過(guò)程中，大多數(shù)存在CMV IgM抗體陽(yáng)性的患者并非是近期的原發(fā)性感染，并不能根據(jù)單一的血清學(xué)檢測(cè)進(jìn)行判定及診斷，應(yīng)聯(lián)合IgM抗體檢測(cè)與IgG抗體親和力分析。

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（收稿日期：2019-12-19） （本文編輯：田婧）