天麻素保護過氧化氫誘導的神經(jīng)元氧化損傷的研究①

尹明姬 池永學 李今子

(延邊大學附屬醫(yī)院，延吉 133002)

癲癇是一類常見的中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病，其主要發(fā)病表現(xiàn)為大腦海馬區(qū)神經(jīng)元異常電位變化引起短暫的中樞神經(jīng)功能異常[1]。癲癇的發(fā)病受到多種遺傳因素和環(huán)境因素的影響，但其深入的致病機制還未闡明[2]。既往研究已經(jīng)表明，癲癇的發(fā)作常常伴隨細胞氧化應(yīng)激水平的升高，而且在癲癇的病理組織中，活性氧(reactive oxygen species，ROS)水平顯著升高，因此氧化損傷與癲癇的發(fā)病密切相關(guān)[3,4]。

天麻素(gastrodin)是蘭科植物天麻塊根中提取的生物活性物質(zhì)，很多研究表明天麻素具有抗氧化、抗細胞凋亡、抗炎等功效，被用于癲癇的輔助治療[5,6]。有研究表明天麻素可以通過調(diào)控p38/Nrf2信號通路抑制神經(jīng)細胞SH-SY5Y的凋亡[7,8]，但其在癲癇治療中的具體機制還需要深入研究。本研究通過建立過氧化氫誘導的SH-SY5Y細胞氧化損傷模型，闡釋了天麻素是否通過調(diào)控PI3K/AKT信號通路緩解氧化損傷引起的細胞凋亡。

1 材料與方法

1.1材料 細胞培養(yǎng)所需的DMEM培養(yǎng)基、胎牛血清、青霉素/鏈霉素、Annexin-V/PI凋亡檢測試劑盒、細胞活性氧探針H2FCAD均購自美國ThermoFisher公司；人超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)ELISA試劑盒購自美國Abcam公司，丙二醛(malondialdehyde，MDA)、乳酸脫氫酶(lactate dehydrogenase，LDH)及谷胱甘肽過氧化物酶(glutathione peroxidase，GSH-Px)ELISA試劑盒均購自上海樊克生物技術(shù)公司；兔源抗Phospho-PI3 Kinase p85 (Tyr458)抗體購自美國CST公司(#17366)，鼠源抗p-Akt1/2/3(Thr308)抗體(#sc271964)、辣根過氧化物酶標記的山羊抗兔IgG及山羊抗鼠IgG均購自美國SantaCruz公司，天麻素購自美國Sigma公司，過氧化氫溶液購自上海生工公司。人視網(wǎng)膜神經(jīng)母細胞瘤細胞系SH-SY5Y購自中國醫(yī)學科學院細胞庫SH-SY5Y細胞。……