28色流式對中軸型脊柱關節炎患者外周血中T細胞亞群差異的鑒定①

李 捷 趙志斌 王崧榕 卞振華 廉哲雄

(南方醫科大學第三附屬醫院，廣州 510000)

中軸型脊柱關節炎(axial spondyloarthritis，ax-SpA)是以骶髂關節和脊柱附著點炎癥為主要癥狀，四肢大關節，椎間盤纖維環及其附近結締組織纖維化和骨化，以及關節強直為病變特點的慢性自身免疫性疾病。某些微生物(如克雷伯桿菌)與易感者自身組織有共同抗原，可引起一系列異常免疫應答[1]。明確引起異常免疫應答的疾病特異性免疫細胞，及時給予早期干預，對抑制ax-SpA的發展有積極作用。多通道流式技術結合大數據分析法為發現新的致病性細胞小亞群提供了可能。本文通過高通量流式細胞術檢測我院5例ax-SpA患者外周血樣本，并對其出現的特異性T細胞小亞群進行分析。

1 材料與方法

1.1材料

1.1.1臨床樣本信息 5例符合國際脊柱關節炎評估協會(ASAS)評估標準的ax-SpA患者和5例健康志愿者來自南方醫科大學第三附屬醫院風濕免疫科，參與者知情同意，每人抽取外周血2 ml用于后續實驗。5例ax-SpA患者平均年齡(32.8±10.89)歲，男女比例為2∶3，血C-反應蛋白(CRP)平均水平為(3.47±1.19)mg/L,紅細胞沉降率(ESR)為(31.00±17.46)mm/h，Bath AS疾病活動指數(BASDAI)、Bath AS測量指數(BASMI)、Bath AS功能指數(BASFI)分別為2.20±1.98、2.16±1.68、2.64±2.79;5例健康志愿者包括3例男性和2例女性，平均年齡(25.6±1.14)歲。

1.1.2主要試劑與儀器 28色流式抗體(表1)、BD FACSymphony流式細胞儀購自BD公司；Ficoll溶液購自STEMCELL Technologies公司。

1.2方法

1.2.1外周血PBMC細胞的分離 臨床患者及健康對照者外周靜脈穿刺取血2 ml保存于乙二胺四乙酸-K3(EDTA-K3)真空采血管，在管內加入緩沖液(PBS+1%BSA)稀釋至4 ml，混勻。將4 ml Ficoll溶液加到15 ml離心管底部，血液稀釋液緩慢加入Ficoll上層，密度梯度離心(500 g×20 min，升6降2)，離心后吸管收集中間白膜層細胞，加入新的15 ml 離心管中，450 g離心5 min收集細胞。……