嵌合性抗ROR1抗體Fab片段的制備及鑒定

殷鄭娜 梅思偉 蔣秀敏 張寧芝

(阜陽市人民醫院，阜陽 236000)

受體酪氨酸激酶樣孤兒受體1(receptor-tyrosine-kinase-like orphan receptor 1，ROR1)在進化上具有保守性，僅在胚胎發育早期有顯著表達[1,2]，在正常成人組織中鮮有表達。ROR1參與細胞的增殖、分化、遷移、血管生成及代謝信號傳導等多種功能，同時在細胞間相互作用以及各器官和組織胚胎發育早期發揮重要作用[1,3]。研究表明，ROR1在多種人類腫瘤組織中異常表達[4-11]。在卵巢癌和乳腺癌中，ROR1通過調節上皮-間質轉化(EMT)的基因表達影響腫瘤細胞的侵襲性，導致其不良預后[12-14]。本團隊前期的研究中證實卵巢癌組織中ROR1的表達量顯著高于正常卵巢組織，并發現ROR1是卵巢癌的獨立預后因素[8]。為探討ROR1在卵巢癌發生發展中的作用，本研究制備了抗ROR1抗體Fab片段，并初步探討該抗體與卵巢腫瘤細胞特異性結合能力，為進一步探究ROR1的作用機制及抗體腫瘤靶向治療奠定基礎。

1 材料與方法

1.1材料 重組人ROR1蛋白(Sino Biological Inc，中國)；弗氏完全佐劑、弗氏不完全佐劑、HRP標記兔抗鼠IgG抗體、HRP標記羊抗人Fab抗體(Sigma，美國)；8周齡BALB/c雌性小鼠(上海斯萊克動物實驗有限責任公司，中國)；骨髓瘤細胞系SP2/0(本實驗室保存)；DMEM 培養基 、RPMI1640 培養基 、胎牛血清(FBS)、1%青霉素/鏈霉素、次黃嘌呤(H)、胸腺嘧啶(T)、氨基蝶呤(A)(Gibco，美國)；大腸桿菌DH5-α、E.coliBL21(南京全式金生物有限公司，中國)；異丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)(上海生工生物工程股份有限公司，中國)；FITC標記羊抗人Fab抗體、商品化抗ROR1抗體(Abcam，英國)；限制性核酸內切酶NdeⅠ、kpnⅠ、NcoⅠ和HindⅢ(Thermo，美國)，DNA連接酶、pMD18-T Vector、逆轉錄試劑盒(TaKaRa，日本)；pcomb3Xλ質粒及pETDUET-1原核表達載體為本實驗室保存；……