長鏈非編碼RNA XIST通過miR-186調控宮頸癌細胞侵襲遷移及凋亡的分子機制①

徐 倩 楊根嶺 張 波 萬 斌 張 瑜

(重慶醫藥高等專科學校藥學院，重慶 401331)

宮頸癌是常見的女性惡性腫瘤，目前主要活療手段為手術治療及放、化療，由于手術治療的局限性及放、化療的毒副作用，基因治療成為研究熱點[1]。宮頸癌的發生與基因調控相關，基因參與腫瘤細胞侵襲遷移等過程，因此，研究宮頸癌發病機制、尋找有效靶基因備受關注[2]。XIST是機體中有廣泛生物學作用的lncRNA，是哺乳動物X染色體失活的調控因子，參與基因組功能發揮、細胞分化等過程[3]。XIST異常表達可能與腫瘤發生相關，高表達XIST的肺癌、前列腺癌等腫瘤細胞惡性程度較高，敲低XIST可抑制腫瘤細胞侵襲并誘導凋亡[4,5]。宮頸癌細胞中XIST表達水平高于癌旁組織，與腫瘤轉移、病理分期等相關[6]。本研究以明確XIST在宮頸癌細胞侵襲遷移和凋亡中的作用為目的，探討其機制，為靶向基因治療宮頸癌提供新思路。

1 材料與方法

1.1材料 人宮頸癌CaSki細胞購自通派(上海)生物科技有限公司；Lipofectamine 2000購自美國Invitrogen公司；XIST shRNA和shRNA control購自長沙贏潤生物技術有限公司；miR-186 inhibitor、inhibitor control購自廣州市銳博生物科技有限公司；miR-186 mimics、mimics control購自上海吉瑪制藥技術有限公司；引物由生工生物工程(上海)股份有限公司合成；Cleaved Caspase-3抗體、MMP-2抗體購自美國Cell Signaling Technology公司；MMP-9抗體購自美國Bio Vision公司。

1.2方法

1.2.1細胞轉染 CaSki細胞接種于6孔板，細胞融合度為60%時用轉染試劑Lipofectamine 2000將XIST shRNA和shRNA control轉染至細胞中。將轉染XIST shRNA和shRNA control后的細胞記為sh-XIST和sh-NC，未轉染細胞為Control。

1.2.2qRT-PCR檢測XIST shRNA對宮頸癌細胞中XIST表達的影響 Control、sh-NC、sh-XIST組細胞轉染后繼續培養48 h，分別提取總RNA，All-in-oneTMFrist-Strand cDNA Synthesis Kit合成cDNA，步驟同試劑盒說明書。……