通過礦化提高蛋白疫苗穩(wěn)定性的研究①

閔婭君 肖云菊 肖江明 胥文春 尹一兵 張雪梅

(重慶醫(yī)科大學(xué)檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)院臨床檢驗(yàn)診斷學(xué)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,重慶 400016)

肺炎鏈球菌 (streptococcus pneumoniae，S.pn) 作為社區(qū)獲得性肺炎的主要致病菌，還可引起肺炎、腦膜炎、敗血癥等嚴(yán)重的侵襲性疾病，而疫苗是預(yù)防傳染性疾病最經(jīng)濟(jì)、有效的手段[1]。蛋白疫苗因其保守性高、抗原性強(qiáng)、易于制備且能有效激活B、T細(xì)胞免疫等優(yōu)點(diǎn)，已成為下一代肺炎鏈球菌疫苗的研究重點(diǎn)[2，3]。但蛋白疫苗對(duì)溫度極其敏感，從生產(chǎn)到運(yùn)輸全過程都需要嚴(yán)格低溫保存，極大地增加了疫苗的使用成本，限制了疫苗的廣泛應(yīng)用[4]。因此，提高蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性對(duì)蛋白質(zhì)疫苗的應(yīng)用具有重要意義。

肺炎鏈球菌溶血素(pneumolysin，PLY)是肺炎鏈球菌的一種重要毒力因子，作為膽固醇依賴性細(xì)胞溶血素(CDCs)的家族成員，可廣泛作用于宿主組織細(xì)胞，發(fā)揮細(xì)胞毒性作用。ΔA146PLY 作為PLY的無溶血活性突變體，被證明是一種安全高效的肺炎鏈球菌候選疫苗[5]。本研究擬以肺炎鏈球菌ΔA146PLY為研究對(duì)象，利用原位仿生礦化技術(shù)為其包裹上一層磷酸鈣外殼，通過酶解反應(yīng)和熱處理觀察其穩(wěn)定性，并通過細(xì)胞實(shí)驗(yàn)及動(dòng)物實(shí)驗(yàn)評(píng)估礦化疫苗ΔA146PLY@CaP的免疫保護(hù)效果，以進(jìn)一步確定其穩(wěn)定性。

1 材料與方法

1.1材料

1.1.1菌株與動(dòng)物 WT-PLYE.coliBL21和ΔA146PLYE.coliBL21菌株由重慶醫(yī)科大學(xué)臨床檢驗(yàn)診斷學(xué)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室制備與保存；大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞BL21(DE3)購自擎科生物科技有限公司；肺炎鏈球菌臨床菌株CMCC31693(血清型19F型)購自中國(guó)醫(yī)學(xué)微生物菌種保藏管理中心；……