骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體miR-10a-5p下調(diào)紫外線抵抗相關(guān)基因(UVRAG)的表達(dá)調(diào)控系統(tǒng)性紅斑狼瘡

劉典鋒 王安鳳 何惠忠

(攀枝花市中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院，攀枝花 617000)

系統(tǒng)性紅斑狼瘡(systemic lupus erythematosus，SLE)多見(jiàn)于女性，是一種多因素介導(dǎo)的自身免疫疾病[1]。免疫調(diào)節(jié)、基因、環(huán)境、荷爾蒙激素和表觀遺傳等異常都有可能導(dǎo)致SLE的發(fā)生，引起先天和后天免疫反應(yīng)[2]，并對(duì)單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、樹(shù)突細(xì)胞以及一些細(xì)胞和體液組分產(chǎn)生功能上的影響[3]。研究證實(shí)，外周血單個(gè)核細(xì)胞是機(jī)體重要的免疫細(xì)胞，其增殖和凋亡與SLE的發(fā)生與發(fā)展密切相關(guān)[4]。骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(bone marrow mesenchy-mal stem cells，BMMSCs)在骨髓中具有成骨前體細(xì)胞的潛能，并擁有免疫調(diào)節(jié)，免疫抑制以及再生功能[5]。目前BMMSCs移植同樣也被應(yīng)用于治療SLE[6]。在細(xì)胞間交流過(guò)程中，可由包含56個(gè)蛋白和核酸的外泌體介導(dǎo)形成[7]，根據(jù)產(chǎn)生外泌體的來(lái)源細(xì)胞類型，外泌體可產(chǎn)生不同的功能，例如介導(dǎo)免疫抑制或者免疫刺激等，干細(xì)胞可應(yīng)用于腫瘤和自身免疫疾病的治療中[8]。大量研究表明，外泌體miRNA在細(xì)胞生理過(guò)程中發(fā)揮重要調(diào)控作用。miRNA同樣參與到SLE的調(diào)控中[9-12]。本研究將探討在骨髓干細(xì)胞移植中，BMMSCs外泌體調(diào)控SLE細(xì)胞增殖及凋亡的機(jī)制。

1 材料與方法

1.1材料

1.1.1細(xì)胞 人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(貨號(hào)：PT-2501；Lonza)，系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者外周血單個(gè)核細(xì)胞取自攀枝花市中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院。

1.1.2試劑 DMEM、RPMI1640培養(yǎng)基和FBS購(gòu)自Gibco；POROSTMHeparin 50 μm購(gòu)自Thermofisher；Ficoll?400購(gòu)自Sigma-Aldrich；反轉(zhuǎn)錄試劑盒PrimeScripTMRT reagent kit以及qRT-PCR試劑盒TB Green?Premix Ex TaqTMⅡ購(gòu)自TaKaRa；外泌體RNA提取試劑盒SeraMir Exosome RNA Column Purification Kit購(gòu)自System Biosciences；Trizol核酸提取試劑盒和Lipofectamine 3000購(gòu)自Invitrogen；RIPA蛋白裂解液和Annexin V-FITC試劑盒購(gòu)自碧云天公司；CCK-8試劑盒購(gòu)自Abcam；qRT-PCR引物由上海生工生物工程有限公司合成；……