姜黃素對嬰兒血管瘤內皮細胞增殖、凋亡的影響及機制①

符垂師 云 川 馮業成 黃 天 (海南醫學院第一附屬醫院兒科，海口 570102)

嬰幼兒血管瘤(infantile hemangioma，IH) 是嬰幼兒最常見良性腫瘤，由中胚葉血管內皮細胞過度增殖所致[1]。IH通常發病于嬰幼兒出生或出生后 3～6 個月內，發病率約為3%～10%，發病機制尚未明確，目前治療手段主要為廣泛性冷凍、放射療法及口服類固醇類藥物等，多種新治療手段如干擾素、硬化劑、激光等也可用于IH治療，但副作用較大[2]。姜黃素是從姜黃中提取的酚類色素，具有多種藥理作用，其抗腫瘤作用不僅與抗腫瘤血管生成有關，還可誘導腫瘤細胞凋亡[3]。目前姜黃素用于嬰幼兒IH治療的作用及機制鮮有報道。本研究旨在探討姜黃素對HemECs增殖、凋亡的影響及機制。

1 材料與方法

1.1材料

1.1.1試劑與儀器 姜黃素購自美國 Sigma公司;HIF-1α、VEGF抗體購自美國 Santa Cruz公司；Trio(A4902-1)購自美國 Invitrogen公司；兔抗人Ⅷ因子、CD31、CD34抗體購自武漢博士德公司；MCL-1、cl-Caspase-3和cl-PARP抗體及其二抗購于Santa Cruz 公司；Annexin Ⅴ/FITC凋亡檢測試劑盒購自美國 Qbiogene 公司；RT-qPCR試劑盒購自日本 TaKaRa公司；Trizol 購自Invitrogen公司；Real-time PCR儀購自美國ABI公司；CO2培養箱購自美國 Thermo Scientific公司；FASCalibur流式細胞儀購自美國BD公司；熒光顯微鏡購自德國Zeis公司；ELX800UV 酶標儀購自美國 Bio-Tek 公司。

1.1.2組織來源 1例IH組織標本來源于我院小兒外科，3個月齡，男性，家屬知情同意。

1.2方法

1.2.1細胞培養與鑒定 參照文獻[4]，取新鮮IH標本，剪成1～2 cm3組織塊，酶消化法分離培養HemECs。將消化后的組織塊剪碎至約1 mm3，接種于培養皿(1%明膠包被)，加入內皮細胞培養基(含10%胎牛血清的RPMI1640培養基)，37℃、5%CO2孵育。免疫熒光法鑒定 HemECs特異性表面標志物Ⅷ因子、CD31和CD34。

1.2.2CCK-8檢測HemECs增殖 將HemECs接……