黃連解毒湯含藥血清對ox-LDL誘導的巨噬細胞泡沫化TLR7信號通路的影響①

于紅紅 俞 琦 盛 蒙 陳 茜 岳文鵬 許 滔 田維毅 (貴州中醫藥大學，貴陽 550025)

動脈粥樣硬化(atherosclerosis，AS)是一種動脈內膜炎性疾病，病變隨年齡呈漸進性，是許多心腦血管疾病的共同病理基礎。由AS引發的心腦血管疾病是全球人類最主要的死亡原因之一，發病率逐年上升[1]。AS早期病變的標志是巨噬細胞攝取氧化低密度脂蛋白(oxidized low-density lipopro-tein，ox-LDL)，進而導致動脈血管壁聚集泡沫細胞、形成斑塊，從而引發AS病變的形成[2]。巨噬細胞作為重要的固有免疫細胞，不僅與炎癥反應密切相關，且在AS形成的初期至斑塊破裂不穩定期過程中起重要調控作用[3]。黃連解毒湯載于《外臺秘要》，具有瀉火解毒之功。研究發現黃連解毒湯具有抗AS等作用[4，5]，其抗AS的分子機制尚未完全明了。現代醫學已明確證實TLR7信號通路在AS中起重要作用，那么黃連解毒湯對AS的干預效果是否涉及對TLR7信號通路的調控影響炎癥因子的表達？鑒于此，本研究采用ox-LDL干預RAW264.7巨噬細胞分化為泡沫細胞，觀察了黃連解毒湯對泡沫細胞炎癥反應以及TLR7/MyD88/NF-κB通路的干預作用，為臨床黃連解毒湯抗AS分子機制研究提供新的思路。

1 材料與方法

1.1材料

1.1.1細胞與動物 RAW264.7小鼠單核巨噬細胞購于上海中喬新舟有限公司。雄性SD大鼠，體質量180～220 g，購于長沙市天勤生物公司,合格證號SCXK(湘)2014-0010。

1.1.2試劑 胎牛血清(美國HyClone)，ox-LDL(Sigma)，Trizol(Invitrogen)，Accutase細胞消化液(美國eBioscience)，逆轉錄、熒光定量PCR試劑盒(TaKaRa)，IL-1β、IL-6 ELISA試劑盒(聯科生物)，油紅O染色試劑盒(北京索萊寶)，TLR7、MyD88、NF-κB抗體及內參抗體(Cell signaling Technology)，BCA蛋白定量試劑盒(雅酶生物)，超敏ECL化學發光試劑盒 (美國Thermo)，HRP標記的二抗(北京中杉金橋)。……