人源性促甲狀腺激素受體單鏈抗體Fc融合蛋白的制備及鑒定

吳黎黎 賈健安 邵璇璇 黃保軍

(安徽醫科大學免疫教研室,合肥 230001)

Graves病(GD)是一種常見的自身免疫性甲狀腺疾病，促甲狀腺激素受體抗體(TRAb)結合于促甲狀腺激素受體(TSHR)，促進甲狀腺濾泡上皮細胞增生，分泌過量甲狀腺激素，引起甲狀腺腫大和甲亢[1]。TRAb檢測對于GD診斷及療效監測具有重要意義[2-4]。TRAb含量極低，因此，其性質及其與TSHR的作用機制研究困難極大，基因工程技術獲取重組單抗是解決這一問題的有效途徑[5]。單鏈抗體(ScFv)分子量小、穿透力強，是特異性和親和性最小的抗體功能片段，廣泛用于基礎醫學研究、疾病體外診斷及疾病的臨床治療[6]。單鏈抗體與全抗體相比，ScFv穩定性較差且功能單一，而Fc端蛋白不但維持ScFv抗體功能和穩定其結構，還可方便抗體純化。本研究構建了含有TRAb單鏈抗體與IgG1Fc序列的重組載體pFastBacTM1-ScFv-IgG1Fc，運用Bac-to-Bac表達系統實現單鏈抗體融合蛋白的高效表達，并檢測目的蛋白免疫學活性。

1 材料與方法

1.1材料

1.1.1菌種及細胞 大腸桿菌DH10Bac、Sf9細胞株和High FiveTM細胞株均購于美國Thermo公司。

1.1.2試劑 蛋白Marker、PureLinkTMHiPure質粒DNA小量提取試劑盒、膠回收試劑盒等均購于美國Thermo公司；SIM SF和SIM HF培養基購于北京義翹神州科技有限公司；dNTP購于美國promega公司；DNA marker購于北京天根生化科技有限公司；TRAb 化學發光檢測試劑購于羅氏公司；SPA-Sepharose CL-4B親和層析柱購于美國GE公司；氨芐青霉素、卡那霉素、慶大霉素、四環素、瓊脂糖、瓊脂粉、酵母提取物、IPTG和Bluo-gal等均購于Biosharp生物科技公司；即用型SABC-POD(人IgG)試劑盒購于博士德生物公司。

1.2方法

1.2.1序列的合成和載體的構建 查閱人源化TRAb抗體的HV和LV序列[7]。……