HBXIP抑制補體介導的細胞毒活性促進肝癌免疫逃逸的機制研究①

安 萍 沈學斌 卞 麗 尚 寧 郭佳晶 石曉琳 賈景飛

(沈陽市第六人民醫院肝病免疫科,沈陽 110006)

肝癌是臨床常見消化道惡性腫瘤，發病率和死亡率高居惡性腫瘤第六位和第二位，惡性程度高、療效差、易轉移和復發，因此深入研究肝癌發生發展及其免疫逃逸機制對其臨床治療具有重要作用[1]。乙肝病毒X蛋白結合蛋白(hepatitis B X-interacting protein，HBXIP)是哺乳動物細胞的組成型蛋白，可與乙肝病毒X(HBX)的C末端特異性結合[2]。研究顯示，HBXIP與乳腺癌、肝癌及卵巢癌等腫瘤的發生發展關系密切[3]。Melegari等[4]證明HBXIP可通過下調HBX活性調節乙肝病毒的復制周期，參與乙肝病毒相關肝癌的發生發展。目前HBXIP研究主要集中于腫瘤細胞凋亡及有絲分裂等過程，腫瘤轉移和免疫逃逸等方面的研究相對較少。本研究探究HBXIP與肝癌細胞免疫逃逸的關系及其分子機制。

1 材料與方法

1.1材料

1.1.1細胞系反載體 HEK293T、HepG2細胞株由我院實驗室保存，含10%胎牛血清、100 U/ml青鏈霉素的DMEM培養基于37℃、5%CO2培養。pLent-GFP-NC-shRNA和pGLVH1-GFP-HBXIP-1-shRNA慢病毒載體由山東維真生物科技有限公司構建。

1.1.2試劑與儀器 LipofectamineTM2000轉染試劑、嘌呤霉素購自美國Thermo Fisher Scientific；RNAprep pure總RNA提取試劑盒購自天根生化科技有限公司；PrimeScript RT reagent Kit逆轉錄試劑盒、SYBR Premix EX Taq熒光定量試劑均購自日本TaKaRa公司；HBXIP、CD46、CD55、CD59、NF-κB p65兔單克隆抗體購自英國Abcam公司；臺盼藍染液購自北京索萊寶生物科技有限公司。

1.2方法

1.2.1慢病毒穩定細胞系構建 HEK293T細胞培養至對數生長期，胰酶消化，接種于6孔板。分別將NC-shRNA和HBXIP-1-shRNA慢病毒載體與包裝質粒psPAX2、pMD2.G共轉染至HEK293T細胞，6 h后換液，48 h后收集上清，0.45 μm過濾器過濾，分別加入對數生長期的HepG2細胞中。……