結(jié)核分枝桿菌Hsp60影響小鼠巨噬細(xì)胞抗原提呈相關(guān)分子表達(dá)的研究①

李 茂 張焱皓 黃 波 李娜娜 羅軍敏 鄢仁晴

(遵義醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院,遵義醫(yī)科大學(xué)免疫學(xué)教研室，遵義 563000)

結(jié)核病是由結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群(mycobacte-rium tuberculosis complex，MTB)引起的慢性感染性疾病。2018年WHO估算全球范圍內(nèi)新發(fā)結(jié)核病例達(dá)1 010萬，我國新發(fā)病例為93萬，發(fā)病率位居全球第三[1]。開展結(jié)核桿菌致病機(jī)理的研究及有效控制結(jié)核病的散發(fā)及流行意義重大。結(jié)核分枝桿菌感染的清除由機(jī)體的固有免疫和適應(yīng)性免疫共同介導(dǎo)，固有免疫由位于抗原提呈細(xì)胞表面或胞漿的模式識別受體激活，其激活的抗原提呈作用和細(xì)胞因子的分泌作用為誘導(dǎo)適應(yīng)性免疫應(yīng)答所必需[2]。熱休克蛋白60(heat shock protein 60，Hsp60)可作為危險信號誘發(fā)機(jī)體的免疫應(yīng)答，這與抗原的提呈、淋巴細(xì)胞與巨噬細(xì)胞的活化有關(guān)[3]。Panayi等[4]發(fā)現(xiàn)被結(jié)核分枝桿菌感染后Hsp60在宿主巨噬細(xì)胞中表達(dá)量增加，過量的Hsp60可能會干擾結(jié)核感染者巨噬細(xì)胞的抗原提呈及相關(guān)分子的表達(dá)。

本實驗采用MTB Hsp60刺激小鼠骨髓巨噬細(xì)胞，然后檢測MHCⅡ類分子，以了解其對小鼠骨髓巨噬細(xì)胞抗原提呈相關(guān)分子表達(dá)的影響。

1 材料與方法

1.1材料

1.1.1實驗動物 20只SPF級健康雌性BALB/c小鼠，購自長沙市天勤生物技術(shù)有限公司，生產(chǎn)證號：SCXK(湘)2014-0011,周齡6～8周，體質(zhì)量16～20 g，所有小鼠飼養(yǎng)于22～26℃，相對濕度40%～80%，明暗交替12 h的環(huán)境中，潔凈飲水和標(biāo)準(zhǔn)飼料自由飲食，倫理聲明：所有動物及實驗依照Animal Care and Use of Laboratory Animals(Ministry of Health，China，1998)的指導(dǎo)進(jìn)行，并通過本校實驗動物和使用倫理委員會批準(zhǔn)。

1.1.2實驗試劑 GM-CSF購自NOVUS公司，PCR相關(guān)試劑購自TaKaRa公司,DMEM低糖培養(yǎng)基購自Gibco公司，胎牛血清購自MRC公司。……