MicroRNA-381靶向調控KLF-4抗腎纖維化的機制研究

王立成，李現鐸，陳冬冬，唐冠寶，門同義

（山東大學附屬千佛山醫院 泌尿外二科，山東 濟南 250014）

腎間質纖維化是各種慢性腎臟疾病終末期的共同病變過程。因腎小管上皮-間質細胞轉化，正常的腎臟結構被細胞外基質（extracellular matrix,ECM）替代。KLF-4 抑制多種細胞上皮-間質細胞轉化，調控腎纖維化發展進程[1-5]。研究發現，MicroRNA（miRNA）是纖維化發生、發展過程中細胞生物學功能的主要調控者[6-8]。本研究旨在分析miR-381 與KLF-4 在腎纖維化發展進程中的調控關系，為診斷及治療腎纖維化提供新的研究方向。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2014年2月—2017年12月山東大學附屬千佛山醫院收治的106 例腎纖維化患者。其中，男性59 例，女性47 例；平均年齡（53.42±12.15）歲。所有患者無泌尿系感染、糖尿病及惡性腫瘤。收集同期本院健康體檢者100 例作為對照組。其中，男性50 例，女性50 例；平均年齡（52.35±10.33）歲。

1.2 外周血采集

采用美國BD 公司一次性血清分離膠管，所有納入患者及健康體檢者于清晨空腹狀況下抽取外周靜脈血約3 ml，靜置。待血清析出后，使用臺式離心機以1 500 r/min 離心10 min，取上層血清，凍存至-80℃冰箱待檢測。

1.3 實時熒光定量聚合酶鏈反應

采用美國Invitrogen 公司Trizol 試劑盒提取總RNA，將提取到的總RNA 按照逆轉錄試劑盒說明書進行RNA 逆轉錄，合成cDNA。應用美國ABI 公司StepOne Plus 實時熒光定量聚合酶鏈反應（quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR）儀，嚴格按照日本TaKaRa 公司SYBR Premix Ex Taq PCR 反應試劑盒的操作說明書進行PCR 反應。

1.4 細胞培養和轉染

NRK49F 細胞購自中國科學院上海細胞庫，在10%磷酸鹽緩沖液（PBS）的DMEM-LG 培養基中，37℃、95%空氣、5%二氧化碳的細胞恒溫培養箱中孵育培養。當細胞生長至覆蓋率達85%時，進行細胞傳代。……