長鏈非編碼RNA MEF2C-AS1調控成骨細胞功能的機制研究

何洋洋，王力剛，趙玉馳

（1.南華大學附屬邵陽醫院 骨科，湖南 邵陽 422000；2.深圳市鹽田區人民醫院骨科，廣東 深圳 518000）

骨質疏松癥被定義為全身性、進行性骨骼疾病，其特點是骨形成與骨吸收之間的不平衡引起骨強度下降從而導致骨折風險增加。骨質疏松的治療以藥物治療為主，根據具體治療機制的不同，可大致分為基礎補充劑、減少骨吸收劑及促進骨合成劑。近年來，人們一直探索著治療骨質疏松的新途徑，其中就包括對SOST基因的研究。SOST基因位于人類基因組的17q12-21 染色體中，其編碼的骨硬化蛋白通過影響Wnt/β-catenin 信號途徑對成骨細胞的骨形成起抑制作用[1]。有研究發現，肌細胞增強因子2C（myocyte enhancer factors 2C, MEF2C）是SOST基因的遠端增強子ECR5 依賴性SOST 表達的主要轉錄調節因子[2]。并且發現MEF2C敲除小鼠表達SOST，且進行性降低了40%～70%，相比對照組小鼠骨密度增加[3]。這說明MEF2C基因是骨細胞表達骨硬化蛋白所必需的。反義長鏈非編碼RNA（long non-coding RNA, lncRNA）作為內源性RNA，與其他轉錄物序列互補，可在轉錄及轉錄后水平調控靶基因的表達[4]。反義基因MEF2C-AS1與正義基因MEF2C的5'UTR 區域重疊，這意味著lncRNA MEF2C-AS1 可能在MEF2C 表達和/或翻譯中起作用[5]。因此本研究擬通過成骨細胞實驗，觀察MEF2C-AS1 對MEF2C、SOST 的作用，揭露其對骨量的潛在作用。

1 材料與方法

1.1 細胞系及培養

人成骨細胞系hFOB1.19 購自美國ATCC 菌種保藏管理中心，采用DMEM/F12 培養基+10%FBS+0.3 mg/ml G418+1%青霉素-鏈霉素混合溶液，于34℃、5%二氧化碳及90%相對濕度的培養箱中培養。利用人成骨細胞系分別轉染pcDNA3.1a（對照組）、pcDNA3.1a-MEF2C-AS1（過表達MEF2C-AS1組）、Smart Silencer 陰性對照（陰性對照組）、lncRNA MEF2C-AS1 Smart Silencer（沉 默MEF2C-AS1 組）、pcDNA3.1a-MEF2C（過表達MEF2C 組）、pcDNA3.1a-MEF2C-AS1+pcDNA3.1a-MEF2C（ 過 表 達MEF2CAS1+MEF2C 組）。……