miR-125b在小鼠白內障模型與人晶狀體上皮細胞凋亡模型中的調控作用

（中國醫科大學附屬第四醫院眼科，中國醫科大學眼科醫院，遼寧省晶狀體學重點實驗室，沈陽 110005）

白內障作為全球首位致盲性眼病，嚴重影響患者的視覺質量與生活質量［1］。雖然手術是白內障目前最為有效的治療方法，但存在手術禁忌證、并發癥、后發性白內障等諸多問題。因此，非手術靶向治療白內障的研究具有重要的社會效益和經濟效益。

在種類眾多的非編碼RNA中，微小RNA（microRNA，miRNA）是一類長20～25個核苷酸的單鏈非編碼RNA，通過直接與靶基因mRNA 3’非編碼區結合的經典途徑以及靶向調控其他非編碼RNA的前體RNA等非經典途徑，進行細胞內調控［2-3］。研究［4］表明，miR-125b與細胞凋亡密切相關，而晶狀體上皮細胞凋亡是非先天性白內障形成的共同細胞學基礎［5］。本研究組前期利用生物信息學軟件預測到促凋亡蛋白BCL-2拮抗劑/殺手1（BCL-2 antagonist killer 1，BAK1）可能與miR-125b存在直接結合位點。BAK1屬于促凋亡家族BCL-2，定位于線粒體的外膜上，是通過線粒體通路傳遞凋亡信號的必要組分［6-7］。因此，本研究擬觀察miR-125b在紫外線誘導的小鼠白內障模型與人晶狀體上皮細胞凋亡模型中的表達，及其對預測靶基因BAK1與人晶狀體上皮細胞凋亡的調控作用。

1 材料與方法

1.1 材料

人晶狀體上皮細胞系SRA01/04由中國醫科大學附屬第四醫院眼科晶狀體實驗室提供。PrimerScriptTMRT 5 Enzyme Mix、SYBR premix Ex TaqⅡ（日本TaKaRa公司）；BAK1（D4E4）Rabbit mAb（美國CST公司）；山羊抗兔二抗（美國Proteintech公司）；miR-125b mimic、miR-125b mimic control；miR-125b inhibitor、miR-125b inhibitor control（廣州銳博生物科技有限公司）；RNAiso（美國Invitrogen公司）；TUNEL細胞凋亡檢測試劑盒（江蘇凱基生物技術有限公司）；LipofectamineTMRNAiMAX（美國Invitrogen公司）。ABI 7500 real-time PCR系統（美國Applied Biosystems公司）；熒光顯微鏡（日本Olympus公司）；……