長鏈非編碼RNA RUNX1-IT1對口腔鱗狀細胞癌增殖、遷移的影響及其作用機制

王雪，李琳，張紅，張雪，王振華

（中國醫科大學 1.生命科學學院生理學教研室，沈陽 110122；2.附屬口腔醫院干診科，沈陽 110002）

口腔鱗狀細胞癌（oral squamous cell carcinoma，OSCC）是具有高轉移率和高復發率的惡性腫瘤，約占口腔癌的90%［1］。目前手術仍為主要治療方式，但患者術后易發生轉移和復發，5年生存率僅為50%［2］。因此，尋找OSCC的發病和轉移機制十分重要。長鏈非編碼RNA（long non-coding RNA，lncRNA）是一種沒有編碼蛋白能力的RNA。越來越多的證據表明lncRNA在OSCC的進展中發揮調控作用［3-5］。lncRNA RUNX1-IT1位于染色體21q22.12區域，長約1 502個核苷酸，研究［6-7］表明它在結直腸癌和胃癌中發揮調控作用，然而lncRNA RUNX1-IT1在OSCC中的功能和機制尚未明確。本研究通過體外實驗探討lncRNA RUNX1-IT1對OSCC增殖、遷移的影響及其作用機制。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 標本來源：收集2018年5月至2019年2月期間中國醫科大學附屬口腔醫院頜面外科手術切除的47例OSCC癌組織和癌旁正常組織，OSCC的診斷依據組織病理學確定。標本收集前經中國醫科大學附屬口腔醫院倫理委員會批準，并經患者知情同意。

1.1.2 細胞培養：OSCC細胞系CAL27、SCC25均購于美國ATCC細胞庫。HaCaT購于中國典型培養物保藏中心細胞庫。CAL27、HaCaT以DMEM高糖培養基（含有10%的胎牛血清）培養，SCC25以DMEM/F12培養基培養，培養液中加入10%胎牛血清，400 ng/mL氫化可的松，0.5 mmol/mL丙酮酸鈉。細胞于37 ℃，5%CO2培養箱中培養。

1.2 方法

1.2.1 實時qPCR：用Trizol法提取組織和細胞RNA。采用PrimeScriptTMRT reagent Kit試劑盒進行反轉錄。利用SYBRPremix Ex Taq Ⅱ在LightCycler480Ⅱ實時 PCR儀上進行實時定量PCR反應。引物序列：lncRNA RUNX1-IT1，上游引物5’-GGACACGCAGAGGAAGT CAA-3’，下游引物5’-GTTCTTGAGGTTGGCGGAGA-3’；GAPDH，上游引物5’-CGGATTTGGTCGTATTGGG-3’，下游引物5’-CTGGAAGATGGTGATGGGATT-3’。以2-ΔΔCt法計算結果。

1.2.2 載體構建和細胞轉染：過表達慢病毒載體購于上海吉瑪基因公司，當CAL27細胞密度達到70%～80%時進行轉染。……