茯苓質(zhì)量控制及藥理學(xué)研究進(jìn)展

陳 慶

(安徽濟(jì)人藥業(yè)有限公司，安徽 亳州 236800)

茯苓為多孔菌科真菌茯苓Poriacocos(Schw.)Wolf的干燥菌核，具有利水滲濕、寧心健脾之功效[]。《神農(nóng)本草經(jīng)》將其列為上品，曰“久服安魂、養(yǎng)神，不饑、延年”，是治療“心脾不足，水飲四泛”的要藥[2]。研究表明茯苓具有鎮(zhèn)靜催眠[3-4]、抗炎[5-6]、免疫調(diào)節(jié)[7-10]、抗腫瘤[11-13]、抗氧化及抗衰老[14-16]、利尿[17-19]、抗病毒[20-22]等作用。茯苓主要成分為三萜類、多糖類及氨基酸，其中茯苓多糖含量在80%以上，三萜類主要以羊毛甾型四環(huán)三萜為主[23]，茯苓酸約為0.174%[24]。茯苓多糖及茯苓酸為茯苓的有效成分，目前關(guān)于茯苓的研究報(bào)道多集中于此二者。鑒于《中國藥典》2015版一部收載的茯苓質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)尚未有含量測定和特征圖譜項(xiàng)目。為使茯苓更好發(fā)揮治療作用，就必須嚴(yán)格控制其質(zhì)量，特別是茯苓多糖及茯苓酸的質(zhì)量。因此，本文就茯苓質(zhì)量控制及藥理學(xué)的相關(guān)研究報(bào)道進(jìn)行綜述。

1 茯苓質(zhì)量控制

1.1 茯苓多糖含量測定

袁娟娟[25]采用紫外-可見分光光度法，運(yùn)用苯酚-濃硫酸顯色法對(duì)不同產(chǎn)地的茯苓中茯苓多糖的含量進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)不同產(chǎn)地的茯苓中茯苓多糖含量有一定差異，其中云南產(chǎn)含量最高，江西產(chǎn)含量較低，可為云南茯苓道地藥材產(chǎn)區(qū)提供依據(jù)。徐雷等[26]采用同樣方法研究發(fā)汗和趁鮮切制對(duì)茯苓多糖含量的影響，結(jié)果采用不同初加工方法對(duì)多糖含量有極顯著影響，發(fā)汗切制法高于趁鮮切制法。方毅等[27]采用紫外-可見分光光度法，運(yùn)用硫酸-蒽酮法顯色法測定茯苓多糖的含量。以上均采用紫外-可見分光光度法測定茯苓多糖含量，雖顯色方法與測定波長有所不同，但操作簡單、數(shù)據(jù)可靠，可以簡單有效地評(píng)定茯苓的質(zhì)量。

1.2 茯苓酸含量測定

周軍等[28]采用HPLC法測定6個(gè)廠家12批次的茯苓配方顆粒中茯苓酸含量，結(jié)果發(fā)現(xiàn)其含量差異顯著，介于0.87～69.13 μg·g-1之間。李蒙等[29]采用HPLC法測定不同產(chǎn)地及不同部位茯苓中茯苓酸的含量，發(fā)現(xiàn)茯苓皮中茯苓酸的含量高于茯神，茯神高于茯苓。魏立華等[30]采用HPLC法測定茯珍兒科膠囊中茯苓酸含量，結(jié)果茯苓酸在5.05～30.75 μg·mL-1濃度范圍呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。李健康等[31]采用UPLC-MS/MS法測定11個(gè)產(chǎn)地的茯苓藥材中茯苓酸和去氫土莫酸含量，結(jié)果茯苓酸和去氫土莫酸分別在26.2～524 μg·L-1、24.2～488 μg·L-1線性關(guān)系良好。以上采用液相色譜測定茯苓中茯苓酸含量，操作簡單、專屬性強(qiáng)、重現(xiàn)性好、靈敏度高，可以作為茯苓酸的質(zhì)量控制方法。

1.3 茯苓中多種氨基酸的含量測定

王維皓等[32]采用UPLC柱前衍生法，以6-氨基喹啉基-N-羥基琥珀酰亞氨基-甲酸酯為柱前衍生化試劑衍生后，測定3個(gè)省24批白茯苓中游離蘇氨酸、丙氨酸、賴氨酸及酪氨酸的含量。結(jié)果24個(gè)批次的白茯苓中均含有丙氨酸，含量范圍為16.97～69.92 μg·g-1；安徽省和云南省收集的樣本可以較好地聚類，湖北省收集的各樣品中氨基酸含量差異較大。陳蓉等[33]采用柱前衍生-HPLC法，以異硫氰酸苯酯為柱前衍生化試劑衍生后，測定茯苓中18種氨基酸的含量。結(jié)果茯苓中脯氨酸、蛋氨酸、絲氨酸等18種氨基酸質(zhì)量濃度在5.889～119.0 μg·mL-1范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系。各產(chǎn)地均以脯氨酸、蛋氨酸和絲氨酸含量為最高。以上采用柱前衍生法，以不同柱前衍生化試劑衍生后，測定茯苓中氨基酸含量，操作簡便、快速、靈敏度高，可用于茯苓中氨基酸的含量測定。

1.4 茯苓及其主要化學(xué)成分的指紋圖譜

宋桂萍等[34]研究不同產(chǎn)地茯苓飲片的HPLC指紋圖譜，建立了茯苓飲片指紋圖譜共有模式，確定了12個(gè)指紋圖譜共有峰。姚松君等[35]采用HPLC指紋圖譜分析方法，建立了茯苓三萜類成分的指紋圖譜。13批茯苓樣品共標(biāo)示出19個(gè)特征峰，相似度較高，其中有11批相似度大于0.95，提示茯苓三萜類成分質(zhì)量較穩(wěn)定。李紅娟等[36]采用HPLC法比較茯苓不同藥用部位中三萜酸類成分的特征指紋圖譜，結(jié)果在22批茯苓藥材指紋圖譜中標(biāo)示出16個(gè)共有峰。結(jié)果表明，白茯苓、茯神與赤茯苓中三萜酸成分存在顯著差異，以赤茯苓中茯苓酸的含量最高。不同產(chǎn)地的茯苓的質(zhì)量間無顯著差異。趙艷麗等[37]利用近紅外光譜鑒別云南不同產(chǎn)區(qū)藥用茯苓，發(fā)現(xiàn)白茯苓與茯苓皮差異較大，提示構(gòu)建不同產(chǎn)區(qū)茯苓鑒別模型應(yīng)將白茯苓與茯苓皮分開。付小環(huán)等[38]采用紫外分光光度法測定茯苓多糖含量，傅里葉變換近紅外漫反射方式采集樣品近紅外光譜，建立茯苓多糖的定性鑒別與定量檢測模型，結(jié)果表明偏最小二乘法定量校正模型R為0.9440，RMSEC為0.072 1，RMSEP為0.076 2；定性分析模型對(duì)10個(gè)預(yù)測樣品的判錯(cuò)數(shù)為0。以上方法專屬性好、重復(fù)性好、可操作性強(qiáng)，可用于茯苓藥材的質(zhì)量控制，具有良好的市場應(yīng)用前景。

2 茯苓中主要化學(xué)成分的藥理作用

2.1 鎮(zhèn)靜催眠

趙天國[3]研究茯苓多糖對(duì)小鼠的鎮(zhèn)靜催眠作用，結(jié)果低、中、高劑量的茯苓多糖均表現(xiàn)出了一定的抗驚厥作用，劑量越高抗驚厥效果越明顯，且茯苓多糖具有協(xié)同戊巴比妥鈉的中樞神經(jīng)系統(tǒng)抑制作用。SHAH等[4]發(fā)現(xiàn)茯苓酸(5 mg/kg)灌胃能提高谷氨酸脫羧酶65/67表達(dá)水平，顯著減少ICR小鼠活動(dòng)度，延長戊巴比妥誘導(dǎo)的睡眠時(shí)間，縮短入睡前等待時(shí)間。茯苓酸鎮(zhèn)靜催眠作用是通過提高氨基丁酸A型受體α和β亞基水平、降低γ亞基的水平實(shí)現(xiàn)的。

2.2 抗炎

石振國等[5]探究茯苓多糖對(duì)急性胰腺炎(AP)大鼠腸道屏障功能損傷和炎性反應(yīng)的作用，發(fā)現(xiàn)茯苓多糖可減輕AP大鼠腸道屏障功能損傷和炎性反應(yīng)，且可能與抑制JAK2/STAT3通路相關(guān)。謝健航等[6]研究茯苓總?cè)?TPC)對(duì)小鼠免疫功能的影響以及對(duì)大鼠佐劑性關(guān)節(jié)炎的治療效果，發(fā)現(xiàn)茯苓總?cè)颇軠p輕遲發(fā)性超敏反應(yīng)小鼠耳廓腫脹度，改善大鼠佐劑性關(guān)節(jié)炎模型的足趾腫脹度，提示茯苓總?cè)茖?duì)小鼠佐劑性關(guān)節(jié)炎有治療作用。

2.3 免疫調(diào)節(jié)

王青等[7]研究發(fā)現(xiàn)小鼠口服茯苓多糖后，可以恢復(fù)環(huán)磷酰胺酰誘導(dǎo)的小鼠T、B淋巴細(xì)胞亞群比例的失衡，明顯優(yōu)化派氏結(jié)、腸系膜淋巴結(jié)中CD3+、CD19+細(xì)胞的比例，但對(duì)脾臟內(nèi)免疫因子的作用不顯著，因此茯苓多糖主要對(duì)腸道黏膜免疫系統(tǒng)起作用。李海霞等[8]研究茯苓多糖(PCP)中PCP-Ⅰ和PCP-Ⅱ作為疫苗佐劑的免疫原性，發(fā)現(xiàn)PCP-Ⅰ和PCP-Ⅱ本身免疫原性弱，作為疫苗佐劑能產(chǎn)生高滴度抗原特異性抗體，安全性良好。劉坤等[9]研究茯苓多糖PCP-Ⅰ作為疫苗佐劑增強(qiáng)抗原特異性體液免疫反應(yīng)的機(jī)制，發(fā)現(xiàn)PCP-Ⅰ可通過促進(jìn)樹突狀細(xì)胞(DC)成熟和增強(qiáng)生發(fā)中心反應(yīng)來增強(qiáng)抗原特異性體液免疫反應(yīng)。王慧蓮等[10]研究茯苓多糖對(duì)系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)患者外周血輔助性T細(xì)胞17(Th17)/調(diào)節(jié)性T細(xì)胞平衡的免疫調(diào)節(jié)作用，發(fā)現(xiàn)茯苓多糖可以通過升高T細(xì)胞并降低Th17細(xì)胞的比例，對(duì)SLE可起到一定的治療作用。

2.4 抗腫瘤

張密霞等[11]研究茯苓多糖對(duì)B16黑色素瘤小鼠人工肺轉(zhuǎn)移的影響，發(fā)現(xiàn)茯苓多糖高劑量可明顯降低肺表面轉(zhuǎn)移灶個(gè)數(shù)，茯苓多糖高、低劑量可減少肺微小轉(zhuǎn)移灶個(gè)數(shù)，高劑量組外周血白細(xì)胞數(shù)量明顯降低。LING等[12]研究茯苓酸對(duì)人乳腺癌細(xì)胞的影響，發(fā)現(xiàn)茯苓酸(20 μmol·L-1)可阻斷核因子κB抑制物激酶(IKK)磷酸化，減少核因子κB抑制物α(IκBα)降解，不影響絲裂原活化蛋白激酶(MAPK)磷酸化水平，抑制核因子κB(NF-κB)信號(hào)通路(對(duì)轉(zhuǎn)錄激活蛋白AP-1沒有影響)，從而降低基質(zhì)金屬蛋白酶-9(MMP-9)蛋白表達(dá)量，抑制乳腺癌細(xì)胞侵襲能力。HONG等[13]發(fā)現(xiàn)茯苓酸(10～40 μg·mL-1)可抑制磷酸肌酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白3(PITPNM3)磷酸化，阻止其配體趨化因子CCL18與 PITPNM3結(jié)合，抑制乳腺癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移和侵襲。

2.5 抗氧化及抗衰老

2.6 利尿

李斌等[17]研究茯苓對(duì)脾虛水濕內(nèi)停大鼠健脾利水的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)及作用機(jī)制，發(fā)現(xiàn)茯苓水煎液、乙酸乙酯組分和多糖組分能顯著提高脾虛后大鼠體重。除醇洗組分外茯苓其他拆分組分能顯著提高大鼠血清白蛋白水平，多糖組分能降低腎髓中水通道蛋白1的水平，茯苓乙酸乙酯和多糖組分能有效提高血清胃泌素水平，茯苓乙酸乙酯組分能有效提高大鼠水負(fù)荷后體重下降率，且增加尿量。楊婷等[18]考察茯苓對(duì)上焦水飲內(nèi)停大鼠的利水功效。結(jié)果表明茯苓高低劑量(12 g/kg、6 g/kg)均可明顯降低肺通透指數(shù)、肺的干濕比及肌酸激酶(CK)含量，并可以顯著增加血清中白蛋白的含量，提示茯苓可通過“強(qiáng)心利水”作用降低上焦水飲內(nèi)停大鼠的肺組織中水液潴留，從而改善大鼠上焦水飲內(nèi)停癥狀。李森等[19]研究顯示茯苓酸具有利尿作用，其利尿機(jī)制主要是與茯苓酸能激活細(xì)胞膜上的鈉鉀ATP酶有關(guān)。

2.7 抗病毒

李帥等[20]發(fā)現(xiàn)茯苓總多糖對(duì)H1N1流感疫苗和HBsAg疫苗具有良好的佐劑作用，能顯著提高小鼠體液免疫功能，但經(jīng)過改構(gòu)的茯苓多糖也具有很強(qiáng)的抗病毒作用。強(qiáng)華貴等[21]發(fā)現(xiàn)羥甲基茯苓多糖(CMP)可抑制HIV-1ⅢB誘導(dǎo)感染C8166細(xì)胞培養(yǎng)上清HIV-1的P24抗原分泌，對(duì)體外HIV致感染MT4細(xì)胞死亡有顯著的保護(hù)作用。張信岳等[22]發(fā)現(xiàn)羥甲基茯苓多糖鈉對(duì)單純皰疹病毒Ⅰ型(HSV-Ⅰ)致豬腎傳代細(xì)胞的細(xì)胞病變具有抑制作用，表明CMP在體外有抗HSV-Ⅰ作用。

2.8 其他藥理作用

目前有文獻(xiàn)報(bào)道，茯苓還具有保肝[39-40]、降血糖[41]、抗抑郁[42]及抗腎衰[43]等作用。

3 結(jié)語

目前有關(guān)茯苓的研究發(fā)現(xiàn)，茯苓多糖及茯苓酸為其主要藥效成分，其含量測定、指紋圖譜及藥理學(xué)研究也有一定進(jìn)展，且已經(jīng)能從茯苓含量測定、指紋圖譜及藥理學(xué)等方面進(jìn)行控制其質(zhì)量及解釋其治療作用。但由于茯苓研究指標(biāo)成分和研究方法的不同，所獲得的含量測定方法、指紋圖譜及藥理學(xué)結(jié)果存在較大差異，且關(guān)于其藥理學(xué)研究多停留在動(dòng)物藥效對(duì)比等初步研究水平，所得結(jié)果較為分散、片面，未能深入闡明其作用機(jī)制。

茯苓為“四君八珍”之一，以其為原料的中成藥達(dá)200多種，臨床配伍率達(dá)80%，有“仙藥之上品”之說，具有重要的醫(yī)藥價(jià)值[44]。目前有關(guān)茯苓的藥效成分多集中于茯苓多糖及三萜類成分，但其含量較低，因地域與品種不同，其有效成分不同，臨床應(yīng)用效果也有所差異。由于茯苓多糖及三萜類成分水溶性較低，傳統(tǒng)水煎提取效率較低，工業(yè)提取存在一定困難。

茯苓研究趨勢(shì)是通過增加含量測定及指紋圖譜的方法，更加精準(zhǔn)地控制其質(zhì)量；優(yōu)化茯苓提取工藝，最大程度提取有效成分，充分發(fā)揮其鎮(zhèn)靜催眠、免疫調(diào)節(jié)、抗炎、抗腫瘤、抗抑郁、利尿等藥理作用；采用細(xì)胞、分子或基因等現(xiàn)代技術(shù)進(jìn)行其藥理學(xué)研究，為揭示其藥效物質(zhì)基礎(chǔ)提供客觀依據(jù)。