不同地區淫羊藿藥材質量分析

黃世瓊，張永東，鄭浩文，彭 婭，銀 政

(1.太極集團重慶涪陵制藥廠有限公司，重慶 408099；2.西藏藏醫學院藏藥有限公司，西藏 拉薩 850000)

淫羊藿為小檗科植物淫羊藿EpimediumbrevicomuMaxim.、箭葉淫羊藿Epimediumsagittatum(Sieb.et Zucc.)Maxim.、柔毛淫羊藿EpimediumpubescensMaxim.或朝鮮淫羊藿EpimediumkoreanumNakai的干燥葉。夏、秋季莖葉茂盛時采收，曬干或陰干，具有補腎陽、強筋骨、祛風濕的功效，用于腎陽虛衰、陽痿遺精、筋骨痿軟、風濕痹痛、麻木拘攣[1]。淫羊藿主要產于陜西、甘肅、山西、河南、青海、湖北、四川等地，生于林下、溝邊灌叢中或山坡陰濕處[2]。作為傳統的滋補類中藥，淫羊藿始載于《神農本草經》，已有2 000多年的歷史，是中國應用最為廣泛、最為悠久的中藥之一[3]。2015年版《中國藥典》[1]收載淫羊藿藥材條下有淫羊藿、箭葉淫羊藿、柔毛淫羊藿、朝鮮淫羊藿4個種。淫羊藿屬品種較多且復雜，中國有淫羊藿屬植物43種，是該屬的現代地理分布中心，而本屬在全世界范圍內約56種[4]。

2015年版《中國藥典》[1]規定了淫羊藿的含量標準，要求本品按干燥品計算，含淫羊藿苷(C33H40O15)不得少于0.50%，為評價淫羊藿質量的重要指標之一。淫羊藿苷對于改善心血管系統功能、調節內分泌、增強免疫、抗腫瘤等均表現出生理活性，還具有延緩衰老、抗疲勞和耐缺氧等作用[5]。吳文輝等[6]研究測定的14個地區淫羊藿的淫羊藿苷僅有6個產地的淫羊藿符合2015年版《中國藥典》0.50%的含量標準，合格率為4.29%。朱升等[7]建立新的HPLC檢測方法測定不同地區淫羊藿的淫羊藿苷含量，對淫羊藿藥材中的各種物質分離效果良好。本文采用2015年版《中國藥典》淫羊藿條下含量測定方法，測定重慶、四川、甘肅、吉林、貴州、陜西6個地區的60個樣品中的淫羊藿苷含量，可以為規范淫羊藿產地質量、提高臨床使用單位和藥品生產經營企業的產品質量提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

1.1.1 材料 60個樣品淫羊藿來自重慶、四川、陜西、甘肅、貴州、吉林地區，經重慶醫科大學楊軍宣副研究員鑒定為小檗科植物淫羊藿EpimediumbrevicomuMaxim.、箭葉淫羊藿Epimediumsagittatum(Sieb.et Zucc.)Maxim.、柔毛淫羊藿EpimediumpubescensMaxim.或朝鮮淫羊藿EpimediumkoreanumNakai的干燥葉，性狀均符合2015年版《中國藥典》有關規定。淫羊藿苷對照品(批號：110737-201516，供含量測定用，中國食品藥品檢定研究院)，乙腈(色譜純)，甲醇(色譜純)，水為純化水，其余試劑均為分析純。

1.1.2 儀器 Agilengt 1260高效液相色譜儀(含自動進樣器、四元泵、二極管陣列檢測器 DAD、柱溫箱)，XSE204電子分析天平(梅特勒-托利多)，YQ-620C超聲波清洗器(上海易凈超聲波儀器有限公司)，DLF-50多功能粉碎機(溫州頂歷醫療器械有限公司)。

1.2 方法

1.2.1 色譜條件與系統適用性 色譜柱：YF19007-JADE-PAR-5um C18色譜柱(4.6 mm×250 mm)，以乙腈-水(30∶70)為流動相，流速為1.0 mL/min，檢測波長為270 nm，柱溫30 ℃。在上述色譜條件下，淫羊藿苷和樣品中其他組分色譜峰可基線分離，淫羊藿苷與相鄰色譜峰的分離度R>1.50。理論塔板數按淫羊藿苷峰計算應不低于1 500。

1.2.2 對照品溶液的制備 精密稱取淫羊藿苷對照品0.012 24 g至100 mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，制成每1 mL含0.122 4 mg的淫羊藿苷對照品溶液。

1.2.3 供試品溶液的制備 取本品粉末(過三號篩)約0.2 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入稀乙醇20 mL，稱定重量，超聲處理1 h，再稱定重量，用稀乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，即得[8-10]。

2 結果

2.1 線性關系考察

按照上述色譜條件，配制不同濃度的淫羊藿苷對照品溶液。精密量取“1.2.2”項中對照品溶液0.5、1.0、2.0、4.0、6.0、8.0 mL分別置10 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，得到濃度分別是6.12、12.24、24.48、48.96、73.44、97.92 μg/mL的系列對照品溶液。分別吸取10 μL注入液相色譜儀，測定峰面積。以色譜峰面積(Y)對淫羊藿苷進樣質量(X)進行線性回歸，得標準曲線回歸方程Y= 13 372X-10 572，r=0.999 8，表明淫羊藿苷進樣量在0.061 2～0.979 2 μg時，與峰面積值有良好的線性關系。

2.2 精密度試驗

精密吸取上述淫羊藿苷對照品溶液10 μL，按照“1.2.1”項的色譜條件重復進樣6次，測定淫羊苷的峰面積，計算淫羊藿苷的峰面積RSD為1.23%，結果表明儀器的精密度良好。

2.3 重復性試驗

取同一箭葉淫羊藿樣品6份，按照供試品溶液制備方法進行制備，分別吸取10 μL，按照上述色譜條件測定淫羊藿苷含量。結果測得淫羊藿苷含量的RSD為1.02%，表明該方法重現性良好。

2.4 穩定性試驗

取同一供試品溶液，分別于0、2、4、6、8、10、12 h后進樣10 μL，測定峰面積，計算淫羊藿苷含量，結果淫羊藿苷含量的平均值為0.93%，RSD為1.34%，表明供試品溶液在12 h內穩定。

2.5 加樣回收率試驗

精密稱取已知含量為0.92%的箭葉淫羊藿樣品0.1 g，分別加入淫羊藿苷對照品溶液(0.122 4 mg/mL)10 mL，即加入的淫羊藿苷量為1.836 mg。按照“1.2.3”項方法制備供試品溶液，測定其含量，計算回收率，平均值為99.28%。其結果見表1。

表1 淫羊藿苷加樣回收率測定結果

2.6 樣品含量測定

取重慶、四川、甘肅、吉林、貴州、陜西地區收集到的60個批次淫羊藿樣品，按照上述制備供試品溶液的方法進行制備，用上述色譜條件檢測，進樣10 μL，測定淫羊藿苷峰面積，計算淫羊藿苷的平均含量。結果見表2。

表2 重慶、四川、陜西、甘肅、貴州、吉林淫羊藿苷含量 (%)

3 討論

本研究采用2015年版《中國藥典》[1]淫羊藿條下的含量測定項下HPLC法測定淫羊藿苷的含量，規定樣品按干燥品計算，含淫羊藿苷(C33H40O15)不得少于0.50%。結果表明，不同產地、不同品種、不同采收加工方式(陰干或烘干)及不同生長年限(1年生或3年生)樣品中淫羊藿苷含量差異較大，60個樣品中，41個樣品符合2015年版《中國藥典》的含量標準，合格率為68%。甘肅、陜西產的淫羊藿含量普遍較高，淫羊藿苷含量為0.78%～1.32%；吉林地區主產朝鮮淫羊藿，淫羊藿苷含量為0.53%～0.65%。檢測的17個淫羊藿和朝鮮淫羊藿樣品中淫羊藿苷的含量均符合2015年版《中國藥典》標準。柔毛淫羊藿在四川、陜西均有分布，淫羊藿苷含量為0.18%～0.68%，含量較低，9批樣品中只有3批合格。重慶地區以箭葉淫羊藿為主，淫羊藿苷含量為0.28%～1.80%，所測樣品中最高含量為最低含量的6倍，差異較大；對重慶涪陵和重慶長壽的12個樣品檢測的含量進行分析，烘干品含量高于陰干品含量，3年生樣品含量低于1年生樣品。

以上收集到的60個樣品，均來自淫羊藿的主要產區，基本具有代表性。分析發現含量差異較大，主要因為品種、產地氣候土壤、采收加工及生長年限的影響。因此，臨床選用淫羊藿藥材時，為保證臨床療效，盡可能選用淫羊藿和朝鮮淫羊藿2個品種，生長期3年以下的產品，采取烘干方式進行干燥。淫羊藿含量控制的研究較多[11-12]，方法較為豐富，馬文娟等[13]采用超高效液相色譜-飛行時間質譜聯用技術對淫羊藿中的淫羊藿苷等化學成分進行定性分析，方法準確、快速、靈敏。同時，有關學者對《中國藥典》收載的淫羊藿品種研究的說法也不盡相同，董河等[14]認為箭葉淫羊藿難以符合藥典標準，建議修改定量指標或單列。本研究認為采用《中國藥典》方法研究淫羊藿中淫羊藿苷的含量測定，條件成熟，誤差小，可以為藥材臨床使用單位及藥品生產經營企業提供質量依據。