一起規(guī)模奶牛場犢牛腹瀉病的病原學(xué)診斷

（新疆兵團(tuán)第二師畜牧獸醫(yī)工作站，鐵門關(guān) 841005）

為了確診新疆某規(guī)模化奶牛場犢牛腹瀉病病原，采集病料和血清樣品進(jìn)行了細(xì)菌分離鑒定和血清中病毒抗體，DNA檢測試驗。

1 材料與方法

1.1 病料采集

剖檢未治療的4頭發(fā)病犢牛，無菌采集心、肝、脾、肺、腎、淋巴結(jié)等臟器組織以及血樣，犢牛編號為犢牛1至犢牛4。再采集6頭發(fā)病犢牛的血樣，犢牛編號為犢牛5至犢牛10。共采集4頭份臟器樣品和10頭份血清樣品。

1.2 主要培養(yǎng)基、試劑

主要培養(yǎng)基：普通營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基、普通瓊脂培養(yǎng)基、麥康凱瓊脂培養(yǎng)基、血瓊脂培養(yǎng)基、脫纖維羊血、三糖鐵瓊脂斜面等。主要試劑：細(xì)小病毒、輪狀病毒、冠狀病毒ELISA抗體檢測試劑盒（均購自武漢純度生物技術(shù)公司），病毒性腹瀉-黏膜病ELISA抗原檢測試劑盒（購自北京愛德士生物技術(shù)有限公司），細(xì)小病毒PCR檢測試劑盒（購自上海雅吉生物有限公司）。

1.3 試驗方法

1.3.1 細(xì)菌分離鑒定[1]

接種培養(yǎng)：將取自4頭犢牛的心臟、肺臟、肝臟、脾臟、腎臟、淋巴結(jié)等臟器組織，分別接種到麥康凱培養(yǎng)基、普通營養(yǎng)瓊脂、血液瓊脂等培養(yǎng)基上，37℃溫箱培養(yǎng)18～24h，觀察并記錄細(xì)菌的生長情況、菌落特征等培養(yǎng)特性。隨后分組對不同形態(tài)典型菌落進(jìn)行純培養(yǎng)。生化試驗：用接種針分別挑取純培養(yǎng)的細(xì)菌，接種于三糖鐵、葡萄糖、甘露糖、蔗糖、乳糖、山梨醇等微量生化發(fā)酵管中，37℃進(jìn)行培養(yǎng)，觀察并記錄試驗結(jié)果。

1.3.2 ELISA和PCR檢測

用細(xì)小病毒、冠狀病毒、輪狀病毒ELISA抗體檢測試劑盒分別檢測細(xì)小病毒、冠狀病毒、輪狀病毒抗體，用病毒性腹瀉-黏膜病ELISA抗原檢測試劑盒檢測病毒性腹瀉-黏膜病抗原，具體操作步驟按試劑盒說明書進(jìn)行。……