FOXO3和轉錄因子SOHLH1對卵母細胞特異性表達基因Bmp15轉錄活性的調控

劉源，杜冰，張雪，金美玉，鄭志紅

（中國醫科大學實驗動物部，沈陽 110122）

卵泡連續多階段的發育過程受多因素調節。在原始卵泡形成到原始卵泡活化階段，卵泡發育不依賴促性腺激素，而依賴于卵母細胞和顆粒細胞之間的信息傳遞［1-3］，多種轉錄因子和旁分泌因子在這一階段發揮重要作用。骨形態發生蛋白15（bone morphogenetic protein 15，BMP15）屬于轉化生長因子β（transforming growth factor-β，TGF-β）家族成員，是卵泡內重要的旁分泌因子，在卵泡發育不依賴促性腺激素階段，對卵泡增殖分化、類固醇激素合成和卵丘擴張等發揮重要作用，敲除Bmp15后小鼠排卵率降低［4-5］。但卵泡內調控Bmp15的因素目前尚未明確。研究［6］表明，叉頭轉錄因子O3（forkhead box O3，Foxo3）轉基因小鼠與野生型小鼠相比，BMP15蛋白表達水平明顯下降。此外，本課題組通過對雌性精子發生和卵子發生的特定基本螺旋-環-螺旋1（spermatogenesis and oogenesis specific basic helixloop-helix 1，Sohlh1）（-/-）型小鼠卵巢的基因表達譜芯片分析，發現Bmp15基因表達水平也顯著下調，因此推測FOXO3、SOHLH1可能調控Bmp15。本研究擬探討FOXO3和轉錄因子SOHLH1是否通過調控旁分泌因子BMP15影響卵母細胞與顆粒細胞交流，旨在完善轉錄因子SOHLH1影響卵母細胞與顆粒細胞間信號交流的分子機制。

1 材料與方法

1.1 材料

實驗用SPF級C57BL/6J雌鼠均由中國醫科大學實驗動物部提供，飼養于屏障系統內，環境溫度保持在20～26 ℃之間，相對濕度40%～70%，光控交替時間12/12 h。本研究經過中國醫科大學實驗動物福利與倫理委員會及實驗動物管理和使用委員會審查通過。

主要試劑：2×Phanta Max Master 酶（中國諾唯贊Vazyme公司），AxyPrep DNA Gel Extraction Kit（美國愛思進AXYGEN公司），T4連接酶、BamHⅠ、KpnⅠ-HF、HindⅢ-HF限制性內切酶（美國NEW ENGLAND Biolabs公……