長鏈非編碼RNA NEAT1對血管平滑肌細胞增殖和凋亡的影響及作用機制

孫駿，肖亮，宋健博

（中國醫科大學附屬第四醫院介入科，沈陽 110032）

動脈粥樣硬化是冠狀動脈粥樣硬化性心臟病、腦梗死和周圍血管疾病的主要病因［1-2］。動脈粥樣硬化的病理基礎是脂質代謝紊亂，其特征是內膜和中膜的動脈病變［3］。血管平滑肌細胞（vascular smooth muscle cells，VSMCs）是動脈壁的重要組成部分，其功能變化可能參與動脈粥樣硬化［4-5］。VSMCs的功能變化也發生在重要器官（心臟、腦和腎臟［6-7］）血管中，可引起局部缺血和壞死（心肌梗死、腦梗死和腎梗死［8］）。然而，目前VSMCs促成動脈粥樣硬化的具體分子機制尚不完全清楚。

最近，已經充分確信了人類基因組表達的表觀遺傳調控，特別是長鏈非編碼RNA（long-chain noncoding RNA，lncRNA）的功能［9］。lncRNA已確定與心血管疾病（動脈粥樣硬化、心肌纖維化、脂質代謝和血管內皮異常等）有關［10］。在由氧化修飾的低密度脂蛋白（oxidized low-density lipoprotein，ox-LDL）誘導的VSMCs中，尿路上皮癌相關1（urothelial carcinoma-associated 1，UCA1）lncRNA通過下調磷酸酶和張力蛋白同源蛋白（phosphatase and tensin homolog，PTEN）來上調表達并拮抗miR-26a，從而調節增殖細胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen，PCNA）、α-SMA和SM22-α的表達［11］。在ox-LDL處理的人冠狀動脈內皮細胞（human coronary artery endothelial cells，HCAECs）中，lncRNA MALAT1表達上調，敲除MALAT1可以通過結合miR -155/SOCS1軸促進ox-LDL處理的HCAECs的細胞因子釋放和細胞凋亡［12］。本研究探討lncRNA NEAT1在VSMCs增殖和凋亡中的作用及其信號傳導機制。

1 材料與方法

1.1 材料

人主動脈VSMCs購自美國ATCC細胞庫。TRIzol試劑盒購自寶生物工程有限公司。轉染試劑LipofectamineTM3000 購自美國Invitrogen 公司，DEME培養基購自美國GE公司，RT-PCR試劑盒購自南京諾唯贊生物工程有限公司。PCR儀為ABI 7500，酶標儀為Thermo FC。β-actin及hnRNPA1抗體購自上海賽信通生物試劑有限公司。

1.2 方法

1.2.1 細胞培養與轉染：VSMCs用含10%胎牛血清、100 U/mL 青霉素和100 mg/mL 鏈霉素的DEME培養基于37 ℃、5%CO2培養，48 h消化傳代。……