GRP78在不同亞型宮頸癌細胞株中表達情況及對順鉑敏感性影響*

張冉浠，周莉，陸安偉，秦娟

550004 貴陽，貴州醫科大學 臨床醫學院(張冉浠、秦娟)；550004 貴陽, 貴陽市婦幼保健院 婦科腫瘤科(周莉、秦娟)；518000 廣東 深圳，南方醫科大學深圳醫院 婦科(陸安偉)

宮頸癌是全球女性死亡的主要原因之一。順鉑通過損傷細胞DNA用于宮頸癌的化療。但順鉑化療的敏感性問題亟需解決。葡萄糖調節蛋白78(glucose regulated protein 78,GRP78)是內質網上的一個主要應激介導蛋白，既往認為GRP78表達水平與宮頸癌發生、發展有關[1]。已有研究發現內質網應激反應(endoplasmic reticulum stress,ERS)可降低P53突變肺癌細胞對順鉑的化療耐受[2]。目前已知GRP78在卵巢腫瘤細胞中有抗順鉑耐藥作用[3]。但GRP78與人乳頭瘤病毒(human papillomavirus,HPV)相關宮頸癌細胞對順鉑敏感性之間的關系尚不明確。本試驗擬探討不同HPV亞型宮頸癌細胞GRP78表達水平的差異；通過不同濃度順鉑處理后，對比內質網激活劑衣霉素聯合順鉑處理后，宮頸癌細胞對順鉑的敏感性及GRP78的表達水平變化，了解ERS與宮頸癌順鉑耐藥間的關系，尋找宮頸癌治療的新的方向。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 人宮頸癌細胞株 SiHa(HPV16+)、HeLa(HPV18+)及C33a(HPV-)購自上海中喬新舟生物科技有限公司。

1.1.2 試劑 DMEM培養基、胰酶、胎牛血清、GRP78(兔抗人)一抗、二抗：羊抗兔IgG、順鉑、衣霉素、細胞全蛋白抽提試劑盒、聚氰基丙烯酸正丁酯(butyleyanoacrylate,BCA)蛋白定量試劑盒。

1.2 主要方法

1.2.1 細胞株培養 培養于含有10%胎牛血清及1%雙抗的高糖DMEM培養液中，于37℃5%CO2培養箱中培養，細胞密度約為5×105個/mL時進行后續實驗。

1.2.2 免疫組織化學法 取3種細胞的細胞爬片各一張，磷酸緩沖鹽溶液沖洗，加入4%多聚甲醛、一抗(GRP78抗體，稀釋倍數1∶100)，濕盒、4℃孵育過夜。……