淋巴瘤合并感染患者中TH1/TH2細胞因子和淋巴細胞亞群的變化

溫珍珍,李銘杰,劉亞楠,王宏,關則兵,潘學誼

(廣東藥科大學附屬第一醫院血液科,廣東 廣州 510080)

惡性淋巴瘤是淋巴結和結外部位淋巴組織的免疫細胞腫瘤,來源于淋巴細胞或組織細胞的惡變[1]。惡性淋巴瘤患者由于機體免疫功能低下,加之化療、放療、免疫抑制劑等治療后又會加劇這一功能的損傷,進而容易引發感染,感染將進一步中斷或延長治療進程,嚴重者甚至可能會影響其預后。因此早期、快速地診斷出感染對臨床治療尤其重要。已有相關文獻[2-4]報道了TH1/TH2細胞因子或淋巴亞群在血液腫瘤治療方面的重要作用,但是在淋巴瘤合并感染中,TH1/TH2細胞因子或淋巴細胞亞群的表達水平研究較少。為了揭示不同的指標與淋巴瘤合并感染的關系,為是否合并感染的診斷及抗感染治療的療效進行評估,本研究通過流式細胞技術,探討TH1/TH2細胞因子、淋巴細胞亞群等與淋巴瘤合并感染的關系。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

選取2018年4月至2019年4月在廣東藥科大學附屬第一醫院血液科診治的淋巴瘤合并感染的121例患者為研究對象(感染組),其中男69例,女52例,年齡17～78歲,中位年齡44歲；同期94例單純淋巴瘤患者為對照組,其中男50例,女44例,年齡19～78歲,中位年齡47歲。惡性淋巴瘤均經臨床及病理共同確診[5],無肝功能、腎功能和心血管疾病等異常。感染組根據臨床及病原體診斷為細菌感染患者76例,其中革蘭陽性菌(G+)組29例,革蘭陰性菌(G-)組47例；非細菌感染組45例,其中病毒感染32例,真菌感染13例。

1.2 標本采集與檢測

兩組患者均于抗感染治療前、感染組于抗感染治療7 d后,清晨空腹抽取外周靜脈血,檢測TH1/TH2細胞因子水平及T淋巴細胞亞群分布情況。檢測方法:淋巴細胞亞群(CD3+、CD4+、CD8+、CD19+、CD4/CD8、NK細胞CD16/56+)應用流式細胞儀抗體雙標法檢測,TH1/TH2細胞因子[白介素(interleukin,IL)-2(IL-2)、IL-4、IL-6、IL-10、腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和干擾素-γ(interferon-γ,INF-γ)]應用流式微球陣列技術進行定量分析。

1.3 統計學分析

采用SPSS20.0軟件進行統計學分析。各組數據經檢驗均為非正態性分布,用中位數[M(P2.5-P97.5)]描述計量資料,用Kruskal-Wallis檢驗(H檢驗)和秩和檢驗分析各組數據間的差異,以P<0.05為差異具統計學意義。

2 結果

2.1 兩組TH1/TH2細胞因子表達水平比較

H檢驗結果顯示，抗感染治療前，感染組TH1/TH2細胞因子表達水平高于對照組(P<0.05,P<0.01)；感染組內不同感染兩兩比較，細菌感染者IL-6、IL-10、INF-γ、TNF-α表達水平高于病毒感染、真菌感染者(P<0.05,P<0.01)，G+菌感染者IL-6、IL-10表達水平高于G-菌感染者(P<0.05,P<0.01)，其余指標比較，差異無統計學意義(P>0.05)。見表1。

2.2 兩組T淋巴細胞亞群分布情況比較

H檢驗結果顯示，抗感染治療前，與對照組相比，感染組CD3+、CD4+、CD4/CD8、CD16/56+偏低，CD8+、CD19+偏高(P<0.05,P<0.01)；感染組內兩兩比較，各指標差異無統計學意義(P>0.05)。見表2。

2.3 感染組抗感染治療前后TH1/TH2細胞因子表達水平比較

秩和檢驗結果顯示，感染組治療7 d后，IL-2、TNF-α表達水平與治療前比較差異無統計學意義(P>0.05)，IL-4、IL-6、IL-10、INF-γ表達水平則低于治療前(P<0.05,P<0.01)。見表3。

2.4 感染組抗感染治療前后T淋巴細胞亞群分布情況比較

秩和檢驗結果顯示，感染組治療7 d后，CD3+、CD4+、CD19+、CD4/CD8、CD16/56+與治療前比較差異無統計學意義(P>0.05)，CD8+則下降(P<0.05)，見表4。

表1 兩組TH1/TH2細胞因子表達水平比較
Table1Comparison of TH1/TH2 cytokine expression between the two groups [M(P2.5-P97.5)]

ρ/(pg·mL-1)

與感染組比較：*P<0.05，**P<0.01； 與細菌感染組比較:##P<0.05； 與G-細菌感染組比較:ΔP<0.05，ΔΔP<0.01。

表2 兩組T淋巴細胞亞群分布情況比較
Table2Comparison of distribution of T lymphocyte subsets between the two groups [M(P2.5-P97.5)] %

組別nCD3+CD4+CD8+CD19+CD4/CD8CD16/56+對照組9485.5(34.3-98.8)?39.7?(6-82.4)35.2(7.8-76.8)??0.1(0-29.8)??1.1(0.1-9.5)?10.8(0.01-42.1)?感染組 細菌感染 G-4774.75(5.7-97.1)35.26(1.4-74.5)75.29(1.9-76.9)6.89(0-76.7)0.37(0.06-7.9)6.23(0.5-93.6)G+2968.35(10.6-82.9)24.78(3.5-48.3)77.85(5.4-41.5)25.54(0.1-81.7)0.49(0.4-1.4)3.08(2.8-37.3) 病毒感染3279.56(77.3-95.5)37.33(28.6-52.2)46.07(38.8-62.3)2.53(0.1-7.4)0.85(0.46-1.3)7.69(1.1-23.4) 真菌感染1376.75(81.6-93.8)33.7(13.8-63.6)37.48(23.3-67.5)4.19(0.01-6.9)0.75(0.2-2.4)8.15(0.9-15.8)

與感染組比較：*P<0.05，**P<0.01。

表3 感染組抗感染治療前后的TH1/TH2細胞因子表達水平比較
Table3Comparison of TH1 / TH2 cytokine expression levels before and after anti-infective treatment in infected group [M(P2.5-P97.5)]

ρ/(pg·mL-1)

與抗感染治療前比較:*P<0.05，**P<0.01。

表4 感染組抗感染治療前后的T淋巴細胞亞群分布情況比較
Table4Comparison of expression levels ofT lymphocyte subsets in the infection group before and after anti-infective treatment [M(P2.5-P97.5)]

%

與抗感染治療前比較:*P<0.05。

3 討論

惡性淋巴瘤是血液系統常見的惡性腫瘤之一，由于化療、放療、免疫抑制劑等治療，患者多存在機體免疫功能的異常，即細胞免疫功能處于免疫抑制狀態，機體的識別和殺傷突變細胞的能力下降，進而容易感染。眾所周知，炎癥和感染可促進和/或加重癌癥。目前診斷感染的金標準仍然是需要找到病原學依據，但是其耗費時間長，不利于臨床早期診斷和治療，因此主要通過一些感染標志物，諸如C反應蛋白(CRP)、降鈣素原(PCT)等，對有無感染及抗生素治療的療效進行評估，但CRP、PCT在診斷感染中具有一定的局限性。比如不能特異性區分細菌感染與自身免疫性疾病和某些血液學惡性腫瘤，給臨床應用帶來了一定的干擾[6-7]。

輔助性T細胞(thelper，TH)對機體免疫系統有著重要的調節作用，在不同抗原刺激下TH可分成TH1與TH2兩個亞群。其能通過產生促炎性細胞因子，不僅能促進效應T細胞增殖、分化、活化在初次免疫應答中發揮抗感染作用，還能促進記憶細胞的產生，在再次感染時更高效的清除病原體感染。T細胞亞群不僅具有有效的抗腫瘤作用，還可通過T細胞介導細胞免疫，因此它與腫瘤患者的免疫狀況也密切相關。本研究基于流式細胞術(FCM)檢測外周血TH1/TH2細胞因子、淋巴細胞亞群，該技術具有高通量、快速、重復性好的優點，適合臨床分析。Tang等[8]研究發現與正常人相比，感染患者中的IL-6和IL-10明顯升高，G+細菌感染中IL-6升高2～10倍以上，G-細菌感染中IL-6及IL-10均升高10倍以上，并且可以鑒別G-或G+細菌感染，本研究顯示，感染組TH1/TH2細胞因子表達水平高于對照組(P<0.05,P<0.01)。感染組內不同病原體感染比較，細菌感染者IL-6、IL-10、INF-γ、TNF-α表達水平高于病毒感染、真菌感染者(P<0.05,P<0.01)，G+菌感染者的IL-6、IL-10表達水平高于G-菌感染者(P<0.05,P<0.01)，其余指標比較差異無統計學意義(P>0.05)。這一研究結果與Tang等學者的結果一致。IFN-γ主要由TH1細胞和自然殺傷(natural killer，NK) 細胞產生，它可以誘導組織相容性復合體(major histocompatibility complex，MHC)Ⅱ類分子的表達，MHCⅡ類分子可以提呈病原體的抗原，促進CD4+T細胞識別感染細胞，進而激發免疫應答[9-10]。本研究中，感染組IL-6、INF-γ表達水平顯著升高，可能原因為惡性淋巴瘤本身是免疫細胞腫瘤，免疫細胞發生異常的增殖使得患者免疫系統處于一種高反應狀態，進而激發免疫應答；升高的IL-6、INF-γ也可能促使炎癥反應持續發生。研究還發現，使用抗感染方案治療后，IL-4、IL-6、IL-10、INF-γ表達水平低于治療前(P<0.05,P<0.01)，其余指標則無明顯差異(P>0.05)，說明血清IFN-γ及IL-6的表達水平可能與淋巴瘤患者是否合并感染有關，可以進一步指導制定抗感染治療方案。

惡性淋巴瘤患者多存在機體免疫功能的異常，即細胞免疫功能處于免疫抑制狀態，機體對識別和殺傷突變細胞的能力下降，而作為細胞免疫最重要的T淋巴細胞能夠通過功能各異的T淋巴細胞亞群來發揮免疫調控作用[11]。根據淋巴細胞在免疫應答過程中的功能可以將其分為T淋巴細胞、B 淋巴細胞和自然殺傷細胞(NK細胞)[12-14]。嚴健等[5]的研究發現，腫瘤患者常伴有外周血T淋巴細胞亞群的變化，主要原因在于當機體出現惡性腫瘤時，由于腫瘤分泌某些因子，使得CD3+細胞、CD4+細胞(輔助/誘導T淋巴細胞)、CD8+細胞計數出現偏差，導致機體免疫反應紊亂。此外，CD8+屬于抑制/毒殺T淋巴細胞，在免疫反應中能夠直接殺傷性細胞，CD8+細胞愈高，免疫抑制愈強，患者機體抵抗力愈弱。CD4+/CD8+比值以判斷人體免疫功能紊亂的臨床診斷敏感指標。CD19+是指人體淋巴免疫系統中的免疫因子，其值增高說明機體出現病變，免疫系統自動作出的免疫反應，當其值降低時，說明機體的免疫力低下。NK細胞(CD16/56+)是腫瘤標志物的一種,如升高提示有病變。本研究發現，與對照組相比，感染組CD3+、CD4+、CD4/CD8、CD16/56+分布降低，CD8+、CD19+分布升高(P<0.05,P<0.01)。經過抗感染治療7天后，CD8+分布降低(P<0.05)，其余指標無明顯變化(P>0.05)。這一結果表明淋巴瘤合并感染時，患者的免疫功能下降，經過抗感染治療能改善患者的免疫功能。可能的原因是淋巴瘤合并感染時CD8+細胞的抑制功能受損，不能抑制CD4+細胞活化B細胞且產生許多自身抗體，表現出體液免疫的過度亢進，使得CD8+細胞反饋性的增多。研究發現這一現象在淋巴瘤合并感染的患者中表現更為明顯。淋巴瘤合并感染時，NK細胞數量明顯減少，NK細胞對抗體的產生具有多向調節作用，NK細胞數量減少減弱了T淋巴細胞、B淋巴細胞的免疫調節作用，導致多種自身抗體的產生[15-17]。經抗感染治療后，CD8+細胞分布降低，這也暗示著患者的抵抗力加強[18-19]。因此檢測淋巴瘤合并感染患者淋巴細胞亞群數量可以了解患者整體免疫狀態。

綜上所述，TH1/TH2細胞因子和淋巴細胞亞群在淋巴瘤、淋巴瘤合并感染患者中，具有一定的差異性，對淋巴瘤患者是否合并感染及感染的治療效果具有一定的鑒別價值。