改良性電抽搐治療對中國重癥抑郁患者犬尿氨酸活性物質濃度影響的研究

鄧書華，謝煥山,2，王占璋，盧浩揚，陳宏鎮，李璐，張沐欽，張曉瓊，尚德為，溫預關

(1． 廣州醫科大學附屬腦科醫院，廣東省精神疾病轉化醫學工程技術研究中心,廣東 廣州 510370；2. 珠海市慢性病防治中心,廣東 珠海 519000)

重癥抑郁是一種常見的精神疾病，發病機制尚不明確，臨床上約有33%的患者對2種或以上的藥物強化或合并心理治療無效[1]，造成病程遷延、自殺風險和致殘率升高、住院時間延長、治療費用提高，給社會和家庭帶來沉重的負擔[2-3]。

臨床中改良性電抽搐治療(modified electrocon-vulsive therapy,MECT)用于治療重癥抑郁是目前公認的對重癥抑郁治療最有效的方法[4]，國外幾項研究表明MECT 通過色氨酸-犬尿氨酸代謝通路發揮抗抑郁效應[7-11]，這些研究對象均集中在西方人群，MECT對中國抑郁患者人群犬尿氨酸能代謝通路的影響的研究較少有報道，因此，本研究采用LC-MS/MS法分別測定健康人、重癥抑郁患者MECT治療前后血清中色氨酸、犬尿氨酸和犬尿喹啉酸的血清濃度水平，探究MECT對中國重癥抑郁人群犬尿氨酸能活性物質水平的影響，為臨床MECT治療重癥抑郁患者提供相關的理論依據。

1 對象與方法

1.1 研究對象

收集2018年6月—2019年6月在我院就診的重度抑郁癥住院患者16例及健康志愿者20例。本研究方案經廣州市惠愛醫院倫理委員會審核批準。

1.1.1 重癥抑郁患者

入選標準：①年齡 l8～45 歲；②依據國際疾病分類第10版(International Classification of Diseases-10，ICD-10)被診斷為重度抑郁的患者；③使用MECT進行治療的住院患者。

排除標準：①合并嚴重的軀體疾病，如心腦血管疾病、顱內高壓、呼吸道疾病和嚴重的骨折；②高血壓、青光眼、動脈瘤，或腦血管畸形；③體內金屬異物，如起搏器或腦內電極； ④癲癇病史； ⑤物質濫用或依賴病史，包括酒精濫用；⑥既往麻醉劑過敏史； ⑦同時合并其他精神障礙，如癡呆、精神分裂癥；⑧主管醫生從治療角度認為不適合進行 MECT 治療。⑨合并使用重復經顱磁刺激技術進行治療的患者；⑩ MECT治療次數小于3次的患者。

1.1.2 健康志愿者

入組標準：①年齡在18～45歲；②健康狀況：無心、肝、腎、消化道、神經系統、精神異常及代謝異常等病史，體格檢查顯示血壓、心率、心電圖、胸透、呼吸狀況、肝、腎功能和血象正常或異常無臨床意義。

排除標準： ①精神或軀體上的殘疾患者；②近3個月內進行獻血等有損機體的行為；③每天飲用過量茶、咖啡和/或含咖啡因的飲料(8杯以上)者；④依從性不好，不能配合試驗者；⑤有證據表明其為藥物濫用者。

1.2 研究方法

1.2.1 實驗設備及試劑 色氨酸(純度99.0%～101.0%,Lot # SLBD9323V)；犬尿氨酸 (純度≥98%，Lot # BCBH77844V)及犬尿喹啉酸 (純度≥98%，Lot #SLBC5374V) 購自Sigma-Aldrich公司。犬尿氨酸-13C415N (純度：98%,lot. 1971-070A6) 及犬尿喹啉酸-d5 (純度:98%,lot. 10-ABY-121-1) 購自Toronto Research Chemicals Inc. (多倫多，加拿大)。色譜純甲醇購自Merck KGaA(達姆施塔特，德國)；質譜純甲酸銨購自 Sigma-Aldrich 公司(班加羅爾，印度)。超純水來自Milli-Q純水系統 (比爾里卡，美國)。

1.2.2 MECT 操作程序 ①患者在治療前 8 h 禁食，測體溫、脈搏、呼吸、血壓，排空大小便；②電極放置在兩側顳部；③MECT 過程由治療師、麻醉師各1名共同完成，總療程≥3 次，麻醉過程包括阿托品 1 mg、丙泊酚；④使用美國產醒脈通電抽搐治療儀，根據患者的年齡設定治療劑量(即能量百分比)；⑤ MECT必須在 ECG、EEG、血氧飽和度、呼吸等監護下進行，以確保患者的安全。

1.2.3 樣品采集 采集重癥抑郁患者MECT治療前后及健康志愿者的靜脈血約3 mL，3 000 r/min離心3 min，取上層血清至2 mL離心管中，-70 ℃保存，備用。

1.2.4 樣品處理與測定 樣品測定參考Li-Jun Hu等[4]的研究，采用LC-MS/MS法測定血清中TRP、KYN和KYNA濃度。

1.2.4.1 樣品處理 ① 色氨酸-犬尿氨酸樣品處理：將100 μL血清樣品加至離心管(2 mL)中，加入內標KYN-13C415N (10 μg/mL) 30 μL，渦旋5 s，加入500 μL甲醇，渦旋1 min，20 000g離心5 min，取上清100 μL進樣分析。② 犬尿喹啉酸樣品處理：將100 μL血清樣品加至2 mL離心管中，加入內標KYNA-d5(150 ng/mL) 20 μL，渦旋5 s，加入500 μL甲醇，渦旋1 min，20 000g離心5 min，轉移全部上清液至1.5 mL離心管中，于45 ℃真空干燥箱中揮干，100 μL流動相復溶，渦旋1 min，20 000g離心5 min，取上清100 μL進樣分析。

1.2.4.2 樣品測定

色譜條件：以甲醇-水(V∶V，犬尿喹啉酸為35∶65，色氨酸-犬尿氨酸為45∶55，含5 mmol甲酸銨)為流動相，流速為0.5 mL/min，色譜柱為Agilent XDB C18(4.6 mm×150 mm,5 μm)；柱溫為35 ℃；色氨酸-犬尿氨酸進樣體積為3 μL，犬尿喹啉酸進樣體積為5 μL。

質譜條件：采用正離子多反應監測模式，電噴霧電離，TRP,KYN,KYN-13C415N,KYNA,KYNA-d5的裂解電壓分別為5,15,15,15,15 V。定量離子對如下：TRP 205.10→188.10；KYN 209.10→149.10；KYN-13C415N 214.10→149.2；KYNA 190.10→144.10；KYNA-d5 195.10→144.10。

1.2.5 統計學處理

2 結果

2.1 一般資料

共納入健康志愿者20例，均為男性，年齡(27.2±5.7)歲，體重(62.8±7.4 )kg；納入重癥抑郁患者共16例，男性患者10例，年齡(28.8±8.1)歲，體重(67.5±11.5) kg，女性患者6例，年齡為(26.0±8.2)歲，體重為(56.0±11.5 )kg。健康志愿者和抑郁癥患者之間的年齡及體重差異無統計學意義(P>0.05)。

重癥抑郁患者中7例患者被診斷為復發性抑郁障礙(重度)，9例患者被診斷為雙相情感障礙抑郁相(重度)，接受MECT平均治療次數為(5.7±1.8)次，其中6例患者合并使用艾司西酞普蘭片，1例患者合并使用氟西汀膠囊，4例患者合并使用舍曲林，4例患者合并使用文拉法辛，1例患者未合并任何抗抑郁藥物治療。

2.2 健康志愿者和重癥抑郁患者犬尿氨酸能物質含量比較2.2.1 健康志愿者和重癥抑郁患者TRP含量比較

健康志愿者TRP含量為(12 091.73±1 703.84) ng/mL，重癥抑郁患者MECT治療前后TRP含量分別為(12 901.9±2 993.9) ng/mL和(11 029.3±4 119.3) ng/mL。重癥抑郁患者MECT治療后TRP水平比治療前明顯降低(P<0.05),但與健康志愿者相比， MECT治療前后TRP水平差異均無統計學意義(P>0.05)。見圖1。

CtroPre-ECTPost-ECT180001200060000ρ(TRP)/(ng?mL-1)*

Ctro:健康志愿者；Pre-ECT：重癥抑郁患者MECT治療前；Post-ECT：重癥抑郁患者MECT治療后(下圖同)。*P<0.05。

圖1健康志愿者與重癥抑郁患者血清TRP濃度

Figure1SerumTrp concentration in healthy volunteers and patients with severe depression

2.2.2 健康志愿者和重癥抑郁患者KYN含量比較

健康志愿者KYN含量為(328.25±86.23) ng/mL，重癥抑郁患者MECT治療前后KYN含量分別為(271.0±88.1) ng/mL和(272.8±102.5) ng/mL。 重癥抑郁患者MECT治療前后相比，以及治療前后與健康志愿者相比， KYN水平差異均無統計學意義(P>0.05)。見圖2。

2.2.3 健康志愿者和重癥抑郁患者KYNA含量比較

健康志愿者KYNA含量分別為(4.10±1.50) ng/mL，重癥抑郁患者MECT治療前后KYNA含量分別為(2.2±1.0) ng/mL和(4.1±1.8) ng/mL。重癥抑郁患者MECT治療后KYN水平升高，差異有統計學意義(P<0.05)；與健康志愿者相比，重癥抑郁患者MECT治療前KYNA含量低(P<0.01),MECT治療后兩者KYNA水平差異無統計學意義(P>0.05)。見圖3。

CtroPre-ECTPost-ECTρ(KYN)/(ng?mL-1)6004002000

圖2健康志愿者與重癥抑郁患者血清KYN濃度

Figure2Serum KYN concentration in healthy volunteers and patients with severe depression

***ρ(KYNA)/(ng?mL-1)86420CtroPre-ECTPost-ECT

*P<0.05，**P<0.01。

圖3健康志愿者與重癥抑郁患者KYNA濃度

Figure3Serum KYNA concentration in healthy volunteers and patients with severe depression

2.2.4 重癥抑郁患者MECT治療前后CGI評分變化

重癥抑郁患者MECT治療前后，癥狀嚴重程度、療效總評及治療效果評分平均值如表1所示。重癥抑郁患者經MECT治療后癥狀嚴重程度、療效總評及治療效果等評分均有改善，差異有統計學意義(P<0.01)。

評定內容治療前治療后癥狀嚴重程度4.4±1.12.9±1.1??療效總評3.3±0.81.8±0.9??治療效果9.5±2.53.8±3.5??

與治療前相比較:**P<0.01。

3 討論

重癥抑郁患者對至少兩種作用機制不同的抗抑郁藥物足量、足療程治療無效，美國精神病協會治療指南將MECT作為重癥抑郁的重要治療方案，其治療有效率約50%～70%[5]。MECT抗抑郁的機理尚未可知，目前提出的假說主要包括神經遞質學說、神經激素類學說及表觀遺傳改變假說。近年來，犬尿氨酸能物質在精神疾病病理生理學研究的地位逐漸被認可，犬尿氨酸代謝途徑是色氨酸代謝的重要通路，犬尿氨酸在代謝過程中生成多種具有生物活性的化合物，這些化合物通常為犬尿氨酸能物質。其中犬尿喹啉酸(kynurenic acid，KYNA)是谷氨酸鹽和煙堿受體拮抗劑，拮抗N-甲基-D天冬氨酸(N-methyl-D-aspartate，NMDA)受體，而另一代謝途徑主要產物喹啉酸(quinolinic acid，QUINA)是NMDA受體激動劑[6]。國外研究結果表明重癥抑郁患者色氨酸-犬尿氨酸代謝通路活性物質水平與健康志愿者存在差異，MECT能夠明顯改變重癥抑郁患者外周犬尿氨酸能活性物質水平，與重癥抑郁臨床治療轉歸存在相關性[7-11]。

本研究采用LC-MS/MS法測定重癥抑郁患者MECT治療前后和健康志愿者血清中TRP、KYN和KYNA的水平，結果表明，重癥抑郁患者體內KYNA水平在未經MECT治療前較低，且與健康志愿者存在差異，經MECT治療后，重癥抑郁患者KYNA水平與健康志愿者差異無統計學意義，提示MECT治療后能夠提高重癥抑郁患者體內KYNA的水平，并與健康人體內水平接近，這一結果與國外的研究結果相一致[7-11]。另外患者經MECT治療后CGI評分變化存在明顯差異，推測患者KYNA水平與抑郁癥病情以及治療療效存在相關性，并且可能成為抑郁癥疾病療效評價的生物標志物或者療效評價客觀指標。

Schwieler等[8]研究結果表明，與健康人相比較，重癥抑郁患者TRP及KYN水平無差異，經MECT治療后，重癥抑郁患者體內色氨酸水平明顯降低，本研究結果與這一結論相一致。但本研究MECT治療后KYN水平差異無統計學意義，與其他研究結果存在差異，可能原因為臨床樣本數量不同或患者種族差異，具體原因還有待在后續的研究中進一步探究。

本研究中重癥抑郁患者合并使用抗抑郁藥物，結果無法排除藥物對犬尿氨酸代謝通路中色氨酸、犬尿氨酸及犬尿喹啉酸濃度的影響，但已發表文獻中抑郁患者接受MECT治療亦同時合并藥物治療，且本研究結果與已發表文獻結果一致[7-10]。本研究受限于臨床生物樣本數量影響，樣本量相對小，相關結論仍需進一步擴大樣本量研究證實。