紫外可見分光光度法測定不同品種柑橘皮中總黃酮含量

鄧菊慶 柏春玲 楊學芳

摘要 [目的]研究不同產地5種柑橘皮中總黃酮含量。[方法]采用紫外分光光度法測定5種柑橘皮中總黃酮的含量，并對此方法進行精密度、穩定性、重復性和加樣回收率等結果的考察。[結果]5種柑橘皮中總黃酮含量最高的是臍橙，其含量是2.53%，其次是柳橙和丑柑，分別是2.24%和1.82%，含量較低的是血橙和廣柑，分別是1.48%和1.27%，方法學考察結果認為該方法是一種簡單穩定、重復性好的測定方法。[結論]該研究為柑橘皮中黃酮的提取利用提供一定的理論基礎。

關鍵詞 紫外可見分光光度法;柑橘皮;總黃酮;含量

Abstract [Objective]The research aimed to study the total flavonoids content in five kinds of citrus peels from different producing areas.[Method]The content of total flavonoids in five kinds of citrus peels was determined by UVVisible spectrophotometry，and the method was investigated for precision，stability，repeatability and sample recovery.[Result]The highest content of total flavonoids in the five citrus peels was Citrus sinensis Osbeck，its content was 2.53%，followed by Citrus sinensis （L.） Osbeck cv.Liu Cheng and Citrus reticulata Blanco cv.Ponkan at 2.24%and 1.82%，respectively.The lower content was Citrus sinensis Doublefine Ameliorée and Citrus sinensis （L.） Osbeck，which were 1.48% and 1.27%，the methodological investigation results confirmed that the method was a simple and stable repeatability measurement method.[Conclusion]This study provides a certain theoretical basis for the extraction and utilization of total flavonoids in citrus peel.

Key words UVVisible spectrophotometry;Citrus peel;Total flavonoids;Content

柑橘屬于蕓香科柑橘亞科植物，我國擁有豐富的柑橘資源，作為南方主要的水果之一，我國栽培面積為世界第一，產量占世界第三，僅次于巴西和美國[1-2]。柑橘皮作為柑橘加工的主要副產物，占整個果重的25%～40%，含有精油、色素、果膠、黃酮類化合物等多種可提取利用的成分[2]。柑橘皮作為傳統的中藥，其黃酮類物質含量豐富，主要包括黃烷酮、黃酮和多甲氧基黃酮3類物質[3]，主要以黃烷酮苷為主。有研究表明，柑橘黃酮具有抗氧化、抗病毒、抗腫瘤、降血糖、降血脂及增強免疫力活性等作用[4-5]。該研究主要利用紫外分光光度法[6]，對來自不同產地的臍橙Citrus sinensis Osbeck（江西省贛南市）、丑柑Citrus reticulata Blanco cv.Ponkan（四川省自貢市）、血橙Citrus sinensis Doublefine Ameliorée（四川省宜賓市）、廣柑Citrus sinensis（L.） Osbeck（重慶市開縣）、柳橙Citrus sinensis（L.） Osbeck cv.Liu Cheng （廣西省柳州市）5種不同品種柑橘皮中總黃酮含量進行測定和比較，為全面開發和利用柑橘皮資源提供一定的試驗基礎。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 研究對象。

臍橙、丑柑、血橙、廣柑、柳橙，所有材料均購于當地農貿市場。

1.1.2 主要試劑。

蘆丁對照品（中國食品藥品檢定研究院，100080-200707）;無水乙醇（四川西隴化工有限公司）;亞硝酸鈉（無錫市亞泰聯合化工有限公司，批號20180301）;硝酸鋁（北京康普匯維科技有限公司，批號20101001）;氫氧化鈉（上海國藥集團化學試劑有點公司，批號20171210）;所有試劑均為分析純。

1.1.3 主要儀器。

可見光分光光度計（日立 U-3010）;電熱鼓風干燥箱（上海森信實驗儀器有限公司）;研缽（成都典銳實驗儀器有限公司）;電子天平（美國OHAUS Corp）;離心機（上海安亭科學儀器廠）;抽濾裝置（上海領德儀器有限公司）。

1.2 方法

1.2.1 供試品溶液的制備[7-8]。

將新鮮柑橘皮切成細絲，分別裝入貼有標簽的1～5號燒杯中，放入80 ℃干燥箱烘干至恒重，缽磨成粉末。精確稱取各燒杯中干粉約1.0 g，置于100 mL容量瓶中，加入70%乙醇至30 mL，浸泡24 h后過濾，濾液用70%乙醇定容于100 mL容量瓶中，得到黃酮提取液。

1.2.2 標準品溶液的制備。精密稱取100 ℃干燥至恒重的蘆丁對照品5 mg，加入70%乙醇溶解后置于25 mL容量瓶中，加水定容，即得0.2 mg/mL蘆丁對照品溶液。

1.2.3 溶液顯色。

精密量取對照品溶液和供試品溶液各1 mL，置于10 mL容量瓶中，先加入5%NaNO2溶液0.4 mL，搖勻，靜置6 min，然后加入10%Al（NO3）3溶液0.4 mL搖勻，靜置6 min，最后加入4%NaOH溶液4.0 mL后，加水至容量瓶刻度線并搖勻放置15 min，以純水加相應試劑為空白對照組，等待檢測。

1.2.4 測定波長的確定。按照“1.2.3”的顯色方法，分別對照品溶液、供試品溶液和空白對照液（超純水）顯色后，于1 cm比色皿中，在200～800 nm波長進行掃描，發現對照品和樣品溶液均顯示在510 nm處有最大吸收峰，因此選定510 nm作為測定波長。

1.2.5 標準曲線的繪制。分別準確移取0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2 mL標準品溶液于10 mL容量瓶中，以純水為空白對照，按照“1.2.3”中方法顯色后，于510 nm波長下迅速測定其余幾組吸光度，以蘆丁標準品濃度為橫坐標、吸光度為縱坐標繪制標準曲線，進行線性回歸。

1.2.6 總黃酮含量的測定[7-8]。精密量取各供試品溶液1.0 mL，分別置于10 mL容量瓶中，空白組加入1.0 mL超純水，按照“1.2.3”中方法顯色后，以空白組為對照，迅速測出供試品溶液在510 nm吸光度的平均值，從線性相關方程計算出相應的黃酮濃度C，再換算成提取液中總黃酮的質量，計算總黃酮含量（X），其公式如下：

其中，C是根據標準曲線擬合方程計算，單位為g/L;V為黃酮提取液總體積（mL）。

2 結果與分析

2.1 蘆丁標準曲線 以蘆丁標準品濃度C為橫坐標、吸光度為縱坐標繪制標準曲線，進行線性回歸，得到回歸方程為Y=1.338 9X+0.025 9（R2=0.996 1），結果表明蘆丁含量在0.2～1.2 mg/mL呈良好的線性關系（圖1）。

2.2 方法學考察

2.2.1 精密度試驗。

精密吸取對照品溶液1.0 mL，置于10 mL具塞試管中，按照“1.2.3”中方法顯色后，依次重復測定6次，結果顯示RSD為0.17%（n=6），說明儀器精密度良好。

2.2.2 穩定性試驗。精密吸取臍橙溶液1.0 mL，置于10 mL具塞試管中，按照“1.2.3”中方法顯色后，每間隔5 min測定一次，依次測定6次至30 min，RSD為1.30%（n=6），說明供試品溶液在30 min內穩定性良好。

2.2.3 重復性試驗。取同一樣品臍橙5份，按“1.2.1”方法制備5份供試品溶液，精密吸取2.0 mL于具塞試管中，按照“1.2.3”中方法顯色后，依次測定吸光度，結果發現平均含量為2.53%，RSD為1.5%（n=5），表明該方法重復性良好。

2.2.4 加樣回收試驗。

精密量取6份已知濃度（0.147 9 mg/mL）血橙樣品黃酮提取液1.0 mL，置于10 mL容量瓶中，分成3組分別加入1.0、2.0、4.0 mL標準品溶液，搖勻，按照“1.2.3”中方法顯色后，測定510 nm吸光度，計算出加樣回收率平均值為99.88%，RSD為1.31%，說明該方法合理可行，可以用于總黃酮含量的測定（表 1）。

2.3 不同品種柑橘皮中總黃酮含量比較 根據“1.2.6”中公式（1）計算出5種柑橘皮中總黃酮含量最高的是臍橙，其含量為2.53%，其次是柳橙和丑柑，分別是2.24%和1.82%，含量較低的是血橙和廣柑，分別是1.48%和1.27%;5種柑橘皮中總黃酮含量差距較小，但含量普遍偏低（圖2）。

3 結論與討論

目前，對于總黃酮含量的測定大部分是選用蘆丁作為標準品，并采用分光光度法進行測定，大量研究表明該方法擦作簡單、測定結果準確且具有良好的重復性[9-10]。因此該研究以5種不同產地柑橘皮為研究對象，采用分光光度法測定其中總黃酮含量，結果表明不同種類柑橘皮中總黃酮含量均有差異，5種柑橘皮中總黃酮含量最高的是臍橙，其含量是2.53%，其次是柳橙和丑柑，分別是2.24%和1.82%。方法學考察的結果也表明該方法穩定性強、重復性好、回收率高，可以用于柑橘皮中總黃酮含量的測定，通過對不同品種柑橘皮中總黃酮含量的比較研究，可以為柑橘皮中黃酮的提取利用提供理論基礎，同時也為柑橘皮的綜合開發奠定試驗基礎。

參考文獻

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